РАЗДЕЛ 2
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Объекты исследований
Для решения сформулированных в диссертации задач нами были проведены
экспериментальные исследования контрольных и опытных серий на 40 беcпородных
котах-самцах массой 2,0-4,5 кг, у 20 из которых брали для изучения венозную
кровь из правых и левых яремных и бедренных вен, а у остальных 20 –
артериальную кровь из правых и левых сонных и бедренных артерий. Кроме котов, в
качестве экспериментальных моделей нами использованы 17 крыс-самцов линии
Wistar, массой 150-200 г, 2,0-2,5 мес, у которых изучали активность процессов
пероксидации и антипероксидации в полушариях головного мозга (с целью
интерпретации полученных результатов). Во время исследований животные
содержались в общепринятых условиях на стандартном рационе вивария согласно
«Санитарным нормам по устройству, оборудованию и содержанию
экспериментально-биологических клиник (вивариев)» (1974).
Нами также были осуществлены наблюдения за кровью 45 людей-добровольцев, мужчин
в возрасте 19-25 лет, у 25 из которых изучалась венозная кровь, у 20 – кровь из
пальцев.
Коты в качестве главных экспериментальных животных нами были выбраны потому,
что они являются более амбилатеральными (45%), чем крысы (10%) и мыши [20].
Наши исследования проведены на взрослых животных, так как у котят значительно
меньшая экспрессия межполушарной асимметрии.
Нами были выбраны животные и люди для того, чтобы доказать, что асимметрия в
живой природе не является стохастическим, случайным явлением, так как присуща
хоть и представителям одного класса (млекопитающие), одного подкласса (истинные
звери), инфракласса (плацентарные), но различных отрядов (человек относится к
отряду приматы, к хищным – коты, к грызунам – крысы), семейств, родов и видов.
Комиссией по биоэтике Украинской медицинской стоматологической академии
(протокол №9 от 20.05.05) установлено, что проведенные исследования
соответствуют этическим и морально-правовым требованиям согласно приказа МОЗ
Украины от 01.11.2000.
2.2. Методы исследований
Кровь у котов забирали в условиях гексеналового наркоза из расчёта 100 мг/кг
тела животного одновременно из яремных, а после бедренных вен справа и слева
при помощи сухого пластикового шприца (одинакового объёма и с одинаковым
диаметром иглы). Венозную кровь у людей получали путём одновременного забора
крови из правой и левой локтевой вены сухим пластиковым шприцом.
Полученную кровь незамедлительно вслед за этим смешивали в соотношении 9:1 с
3,8%-ным раствором цитрата натрия. Кровь из пальцев у людей для исследования
получали путём одновременного прокола скарификатором безымянного пальца правой
и левой руки и после этого также перемешивали с цитратом натрия для
предупреждения свёртывания. В дальнейшем кровь центрифугировали при 1500 об/мин
в течение 10 мин для получения тромбоцитарной плазмы. Часть плазмы повторно
центрифугировали в течение 30 мин при 3000 об/мин для оседания в ней
тромбоцитов и получения безтромбоцитарной плазмы, которую потом использовали в
качестве субстратной для определения влияния на неё цельных и отмытых
эритроцитов (супернатанта). Смыв с эритроцитов (супернатант) для оценки
активности эритроцитарных факторов гемокоагуляции мы получали путём
однократного отмывания эритроцитов 0,9%-ным раствором натрия хлорида в
соотношении 3:1 и последующего центрифугирования в течение 10 мин при 1500
об/мин, надосадочную жидкость использовали в качестве супернатанта.
Ткани мозга забирали в условиях гексеналового наркоза и из них в дальнейшем
готовили гомогенаты в физиологическом растворе хлорида натрия из расчёта 1:100,
которые подлежали центрифугированию при 1500 об/мин в течение 10 мин, а после
надосадочную жидкость использовали для определения активности про- и
антиоксидантов.
Нами были изучены следующие морфо-функциональные свойства эритроцитов:
количество эритроцитов, концентрация гемоглобина, гематокрит, вязкость, СОЭ,
кислотная резистентность эритроцитов, способность эритроцитарных мембран к
деформации, время рекальцификации, тромбиновое время, время лизиса сгустка
эуглобулинов, эритроцитарные индексы (среднее содержание гемоглобина в
эритроците, средняя концентрация гемоглобина в эритроците, средний объём
эритроцита).
Во всех случаях нами были использованы стандартные методики (таблица 2.1).
Таблица 2.1
Методы изучения реологических свойств крови и эритроцитарного гемостаза
Изучаемые показатели
Субстрат
Авторы
Количество эритроцитов
Кровь
Меньшиков В.В., 1987 [92]
Средний объём эритроцита
Эритроциты
Г.И.Козинец, В.А.Макаров, 1998 [77]
Меньшиков В.В., 1987 [92]
Деформированность эритроцитов
Эритроциты
Григорьев Г.И., 1999 [43]
Кислотная резистентность эритроцитов
Эритроциты
Гительзон И.И., Терсков И.А., 1959 [38]
Скорость оседания эритроцитов
Эритроциты
Меньшиков В.В., 1987 [92]
Концентрация гемоглобина
Кровь
Меньшиков В.В., 1987 [92]
Среднее содержание гемоглобина в эритроците
Эритроциты
Г.И.Козинец, В.А.Макаров, 1998 [77]
Меньшиков В.В., 1987 [92]
Продолж. табл. 2.1
Вязкость крови
Кровь
Меньшиков В.В., 1987 [92]
Гематокрит
Кровь
Меньшиков В.В.,
1987 [92]
Время рекальцификации
Плазма,
эритроциты,
смыв
Bergerhof H., Roka L. 1954 [168]
Баркаган З.С., Момот А.П.,
2001 [19]
Тромбиновое время
Плазма,
эритроциты,
смыв
Баркаган З.С., Момот А.П.,
2001 [19]
Время лизиса сгустка эуглобулинов
Плазма,
эритроциты,
смыв
Kowarzyk K., Buluk K., 1954 [246]
Баркаган З.С., Момот А.П., 2001 [19]
Время лизиса сгустка эуглобулинов
Плазма,
эритроциты,
смыв
Kowarzyk K., Buluk
- Київ+380960830922