РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ, МОДЕЛІ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1. ОБ’ЄКТИ ТА ПРЕДМЕТИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1.1. Характеристика лабораторних тварин, залучених до експериментальних
досліджень.
Експериментальні дослідження виконані з залученням нижче вказаних видів
лабораторних тварин:
547 білих статевозрілих щурів – самців масою 160 –220 г;
55 гербелів обох статей массою 150 – 170 г.
Всі тварини утримувались на стандартному раціоні харчування віварію, при
природній зміні дня та ночі. Догляд, утримання та харчування тварин
здійснювалися відповідно до вимог нормативних документів [83, 98] в стандартних
умовах віварію ДДМА. Усі експериментальні процедури та оперативні втручання
здійснювали згідно з "Положенням про використання тварин у біомедичних
дослідах" [56].
2.1.2. Препарати, використані в дослідженні
В експериментальних дослідженнях використані наступні фармакологічні засоби:
Аміналон, 250 мг/кг (капсули по 250 мг, «Київський вітамінний завод», Україна)
Пірацетам, 500 мг/кг (розчин для ін’єкцій, 20% ампули по 5 мл, ЗАО
фармацевтична фірма «Дарниця», Україна)
Фенібут, 250 мг/кг (субстанція, Олайнський ХФЗ, Латвія)
Пікамілон, 50 мг/кг (таблетки по 50 мг, «Акрихин», Росія)
Натрію хлорид, 0,1 мл/100 г (0,9% розчин в ампулах, "Галичфарм",
Україна).
Всі препарати у вказаних дозах вводились тваринам експериментальних груп –
перорально аміналон, пікамілон щурам та інтраперітонеально пірацетам та фенібут
щурам та гербелам. Розчинення таблеток проводили з використанням фізіологічного
розчину, який також вводився в об’ємі 0,1 мл/ 100 г тваринам контрольної
групи.
Дози препаратів відповідали загальноприйнятим в експериментальних роботах на
тваринах [47, 100, 127].
Препарати вводилися лабораторним тваринам у вказаних дозах щодня в ранковий час
протягом 18 діб.
2.2. МЕТОДИ ТА МОДЕЛІ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.2.1. Метод вивчення рухово-дослідницької активності та емоційного реагування
в тесті “відкрите поле”
Вивчення особливостей дії ноотропних препаратів передбачує створення штучних,
нетипових, стресорних для піддослідних тварин обставин, які не сприяють
адекватним проявам їх поведінкової діяльності. В зв'язку з цим, для більш
детальної порівняльної характеристики активності досліджуваних засобів ми
вважали за доцільне з’ясування характеру їх впливу на показники
безумовно-рефлекторної активності експериментальних тварин з використанням
тесту "відкрите поле", який дозволяє визначити тип дії кожного препарату на
центральну нервову систему, а також з'ясувати характер його впливу на
орієнтовно-дослідницьку активність і емоційну сферу в групі тварин, що задіяна
в експерименті [20, 90].
Тестування показників рухово-дослідницької активності та емоційного реагування
щурів проводили з використанням спеціальної площадки розмірами 100 х 100 см,
поділеної на 16 квадратів, в кожному з яких знаходився круглий отвір діаметром
30 мм – “нірка”.
Реєстрацію результатів тестування показників безумовно-рефлекторної активності
тварин в тесті “відкрите поле” проводили шляхом підрахунку перетнутих квадратів
(горизонтальна рухова активність), кількості підйомів на задні лапи
(вертикальна рухова активність), кількості заглядань в “нірки” (дослідницька
активність), тривалості актів грумінгу та кількості актів дефекацій (емоційна
активність) протягом 3 хвилин спостереження.
2.2.2. Методика визначення ступеню моторної активності лівої гемісфери
Прийнявши до уваги дані про провідну роль активності лівої півкулі в
организації цілеспрямованих рухів, була використована методика, заснована на
цих особливостях функціювання мозку. Моторна активність лівої гемісфери
визначалася за методикою «відкрите поле» [20, 90]. Методика дозволяє оцінити
інтенсивність цілеспрямованих рухових реакцій в умовах вільної поведінки.
Інтенсивність рухів щурів визначалася за кількістю перетнутих квадратів
«відкритого поля» за перші 3 хвилини спостереження. Проводились досліди на
кожній тварині кожного дня на протязі 4 діб. Активність лівої гемісфери
оцінювалась шляхом визначення коефіцієнту асиметрії за формулою:
Кб=Q/t,
де Q- загальна кількість перетнутих квадратів за час (t) 4 дослідів.
Потім розраховували натуральний логарифм значення Кб [10, 72]. Після визначення
вихідного значення Кб для кожного щура, тварини умовно були поділені на 2
групи. До першої групи були віднесені тварини зі значенням Кб більш за 2,0,
тобто умовно з більш високою активністю лівої гемісфери, до другої - щури з Кб
меньшим або дорівнюючим 2,0 (з умовно низькою активністю лівої гемісфери).
Тваринам вводився ноотроп, що досліджувався, 1 раз на день протягом 18 діб. З
15 доби курсового введення ноотропу проводилось дослідження моторної активності
лівої гемісфери за зазначеною методикою. Потім розраховувались зміни характеру
функціональної моторної асиметрії у кожного щура під впливом ноотропних
засобів.
2.2.3. Моделювання гострої ішемії головного мозку у лабораторних тварин
На даний час розроблено та описано декілька методів моделювання
експериментальної церебральної ішемії у лабораторних тварин [4, 33, 55, 75,
134]. Кожна з моделей ішемії, на наш погляд, відповідає поставленій меті
дослідження та має право на існування в певній науковій задумці. Крім того,
останнім часом з’являються дані про вибіркову чутливість різних видів
лабораторних тварин до окремих досліджень мозку, різну чутливість тварин у
межах одного класу до ішемії мозку [133, 196, 215]. Це може бути пов’язано з
різними типами системи кровообігу головного мозку майже у тварин в межах одного
класу (гризунів). Деякі дослідники застосовували однобічну оклюзію загальної
сонної артерії [75, 76, 99, 100, 127
- Київ+380960830922