РОЗДІЛ 2
ВИБІР НАПРЯМКІВ ДОСЛІДЖЕНЬ, МАТЕРІАЛ ТА МЕТОДИ
ВИКОНАННЯ РОБОТИ
2.1. Місце та умови проведення досліджень
Дослідження по розробці методу імуноферментного аналізу при діагностиці класичної чуми, хвороби Тешена, лейкозу великої рогатої худоби, трихінельозу, бешихи свиней та створення наборів діагностикумів, включаючи етапи розробки методів очищення та концентрування вірусів, відпрацювання параметрів постановки ІФА, одержання імунопероксидазних кон'югатів, діагностичні дослідження патологічних матеріалів проводились у лабораторії діагностики Інституту ветеринарної медицини УААН.
Бактеріологічні дослідження та постановку реакції проби росту при бешисі свиней проводили в лаборіторії контролю та випробування біологіч- них препаратів Інституту ветеринарної медицини УААН.
Постановку методу флюоресцюючих антитіл при діагностиці класичної чуми свиней проводили в лабораторії епізоотології Інституту ветеринарної медицини.
Досліди з контрольним зараженням при класичній чумі свиней проводили на базі станції по вивченню особливо небезпечних хвороб в м.Житомирі.
Виробничі дослідження по вивченню напруги гуморального імунітету при класичній чумі свиней, бешисі свиней проводили в КСП "Прогрес", Макарівського району, Київської області, КСП "Київський", Києво-Святоши-нського району, Київської області, які спеціалізуються на вирощуванні та відгодівлі 12 тис. свиней на рік; держгоспах - комбінатах "Калитянський", "Нива Трудова" - найбільших господарствах України, де відгодовується 108
тис.свиней на рік. Збудовані вони відповідно до технологічної документації фірми "Джі-е-Джі" (Італія).
На комбінатах вирощують свиней великої білої породи, ландраса та їх помісів; свинарський комплекс "Трубіжський", Київської області та "Прикар- патський", Івано-Франківської області із типовим технологічним процесом та закінченим циклом виробництва по вирощуванню 54 тис. свиней на рік.
Усі перераховані діагностичні наукові лабораторії мали необхідні умови для проведення досліджень.
2.2. Штами збудників
Штами ентеровірусів по класифікації Дербишира 1982 р.:
- шт."Закарпатський" (І серогрупи хв.Тешена) - одержано з лабораторії
вакцинних препаратів ІВМ. Титр вірусу в культурі клітин СНЕВ 8,2-9,0 lg ЦПД 50/1,0;
- F-34 (ІІІ серогрупи) - одержано з ВДНКІ ветпрепаратів 27.05.82 р. в ліофілізованому стані. Титр вірусу в культурі клітин СНЕВ 5,33 ЦПД 50/1,0 на рівні 10 пасажу;
- F-7 (VІ серогрупи) - одержано з ВНДІВВІМ, м.Покров 14.08.82 р. в ліофілізованому стані. Титр вірусу в культурі клітин СНЕВ 7,0 ЦПД 50/1,0 на рівні 6 пасажу;
- У-13 (VІІ серогрупи) - одержано з ВНДІВВІМ, м.Покров 14.07.82р. в ліофілізованому стані. Титр вірусу в культурі клітин СНЕВ 7,5 ЦПД 50/1,0 на рівні 8 пасажу.
Штам ротавірусу:
- шт. "К", культуральний ротавірус свиней, одержано з ВІЄВ.
Штам парвовірусу свиней:
-шт. "И61", культуральний парвовірус свиней, одержано з ВІЄВ.
Штами вірусу хвороби Ауєскі:
- шт.УНДІЄВ- 18 В,
- шт. "К" - одержано з БДАУ в 1996 р.
Штами класичної чуми свиней:
- шт."ЛК-ВНДІВВІМ" - одержано з ВНДІВВІМ, м.Покров 1992 р. в ліофілізованому стані, репродукований в культурі клітин тестикул баранів;
- шт."ЛК-К" - одержано з ВНДІВВІМ, м.Покров 1994 р. в ліофілізованому стані, репродукований в культурі клітин РК-15;
- шт."Альфорд" - одержано в Польщі в 1995 р., репродукований в куль-
турі клітин РК-15;
- шт."Лапест" - одержано в Польщі в 1994 році в ліофілізованому стані;
- вірулентний шт."Ши-Минь" - одержано з станції по вивченню особли- во небезпечних хвороб.
Штам бактерій бешихи свиней:
- ВР-2, ВДНКІ- 6/24 ветпрепаратів з концентрацією мікробних клітин не
менше 10 млрд. в cм3;
Лейкоз : - вірус лейкозу великої рогатої худоби, одержаний з НВП
"Лейкопол", м.Полтава, репродукований в культурі клітин FLK.
Личинки трихінел вперше одержано від хворих свиней з Кіровоградської обл., Устинівського р-ну, с.Докучаєво, при подальших пасажах на білих щурах по 2-3 пасажі на рік. Хроматографічну очистку та концентрування вірусів проводили на ультрафіолетовому детекторі типу "Увікорд" при довжині хвилі 252 нм. В роботі по одержанню хроматографічно очищеного альбуміну для ІФА використовували сироватку крові ВРХ без консервантів, яку отримано з заводу медпрепаратів, м.Київ .
Очищення та концентрування вірусів проводили комбінованими методами адсорбційної та гель-хроматографії на макропористих кремнезем- утримуючих сорбентах (чистих та модифікованих N-вінілпіролідоном).
2.3. Культури клітин та сольові розчини
В роботі використовували перещеплювальні культури клітин СНЕВ,
ПТП, які отримували в лабораторії культур клітин Іституту ветеринарної медицини УААН.
Для вирощування культури клітин, як живильне середовище викорис- товували середовище "199" Свердловського підприємства по виробництву бактерійних препаратів, НІІ вірусних інфекцій, 5% гемогідролізат Білорусько- го підприємства по виробництву бактерійних препаратів БІІЕМ, середовище Ігла і 0,5% гідролізат лактабулін. До ростового середовища додавали 10% нормальної сироватки крові великої рогатої худоби.
Культури клітин вирощували в пробірках і матрацах (1,5 л) згідно з "Методичними рекомендаціями по виготовленню та використанню в науково-дослідних ветеринарних лабораторіях первинних культур клітин тестикул, нирок і щитовидної залози" .
Для вирощування культур клітин використовували сольові розчини, на основі яких готували живильні середовища. Розчин готували із хімічно чистих солей на свіжовиготовленій демінералізованій воді (опір не менше 1,5х10 cм3).
Для приготування розчинів і живильних середовищ використовували
такі інгредієнти: гідрат ок
- Київ+380960830922