Химико-фармацевтические аспекты тамоксифена и его Е-изомера

СОДЕРЖАНИЕ
Список сокращений..............................................5
ВВЕДЕНИЕ.......................................................6
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ..............................................11
Глава 1. Фармакологические аспекты тамоксифена и его Е-изомсра
1.1. Тамоксифена цитрат - первый из противоопухолевых препаратов
антиэстрогенного ряда.................................11
1.2. Механизм действия.....................................13
1.3. Фармакокинетика и метаболизм..........................17
1.4. Эффективность тамоксифена при раке молочной железы....18
1.5. Побочные действия и токсичность.......................19
1.6. Аналоги тамоксифена...................................22
Глава 2. Фармакопейный анализ тамоксифена и Е-изомсра.........27
2.1. Фармакопейный анализ субстанции.......................29
2.2. Фармакопейный анализ таблеток.........................38
Заключение....................................................43
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.......................................44
Глава 3. Исследование физико-химических свойств тамоксифена и
торемифена...................................................44
3.1. Препараты.............................................44
3.1.1. Тамоксифена цитрат и его Е-изомер..................44
3.1.2. Торемифена цитрат и его Е-изомер...................46
3.2. Идентификация методом ИК-спектроскопии................47
3.2.1. Подготовка проб и проведение анализа...............49
2
3.2.2. Результаты исследований.................................50
3.3. Идентификация методом УФ-спектрофотометрии.................56
3.3.1. Подготовка проб и проведение анализа....................57
3.3.2. Результаты исследований.................................57
3.4. Спектрофотометрия в видимой области........................60
3.5. Заключение.................................................62
Глава 4. Количественное определение тамоксифена в таблетках методом спектрофотометрии в видимой области...........................63
4.1. Построение калибровочного графика..........................64
4.2. Проведение анализа.........................................65
4.3. Количественное определение.................................66
4.4. Обработка результатов......................................71
4.5. Заключение по главе........................................72
Глава 5. Количественное определение тамоксифена цитрата, тореми-
фена цитрата и сопутствующих примесей методом ВЭЖХ................73
5.1. Разделение Ей Z изомеров тамоксифена цитрата и торемифена цитрата.........................................................73
5.1.1. Оборудование и материалы................................74
5.1.2. Оценка хроматографических условий и результаты анализа ....74
5.2. Количественное определение тамоксифена цитрата, торемифена цитрата и посторонних примесей..................................82
5.2.1. Подготовка проб и проведение анализа....................83
5.2.2. Обработка результатов...................................95
5.3. Заключение.................................................97
3
В культурах фетальных фибробластов, в которых отсутствует механизм регуляции, опосредованный рецепторами эстрогенов, в ответ на присутствие тамоксифена в 30 раз возрастает продукция ингибирующего фактора роста - бета. Эти и другие данные свидетельствуют о способности тамоксифена действовать как на РЭ-положительные, так и на РЭ-отрицательные клетки [8,27,32,72,49,100,134].
Показано, что часть клеток РМЖ человека под действием тамоксифена погибает по неспецифическому цитотоксическому механизму. Идентифицировано (Fisher В. et. al.) несколько биохимических моделей, которые могут привести к этому. Например, связывание факторов роста с мембранным рецептором приводит к активации метаболизма мембранных фосфолипидов (рис. 2), вызывает увеличение продукции вторых посредников - диацилглицерина (ДАГ) и инозитол-1,4,5-трифосфата (IP3),
ПК-С= протеинкиназа С ДАГ - диацилглицерин
Ф актор роста
Нол»а деке
ПК-С
і
Мембранный у
Р*ЦЄ"™Р Клеточная
00 4 Метаболиом
фосфолипидо»
мембрана
I
Транспорт ионо* .
Фосфорилироіаниебелко» I Цитоплазма
Агги »ацил кал модул ина
Митогенеэ ^ '------^ 0©^ч нол* а деке
1Р3 = инозитол-трифосфат [Са2+] = концентрация кальция - = торможение
Рис.2. Ингибирование факторов роста иод действием Нолвадекса (тамоксифена) (Fisher В. et. al.)
15
который активирует протеинкиназу С (ПКС) и увеличивает концентрацию кальция внутри клетки. Протеинкиназа С и внутриклеточный кальций могут действовать независимо друг от друга или синергически в ускорении репликации клеток (рис. 2). В микромолярных концентрациях in vitro та-моксифен ингибирует ПКС и кальмодулин, что приводит к торможению клеточного роста [32,97,113,134].
Имеются данные о действии тамоксифена на модификатор биологического ответа путем увеличения активности естественных киллеров [27, 143]. Очевидно, действие тамоксифена на механизмы естественной иммунологической защиты играют важную роль в увеличении без рецидивной и общей выживаемости, независимо от статуса рецепторов эстрогенов. Возможно, это стимулирующее действие может отчасти нейтрализовывать иммуносупрессивные эффекты цитотоксической химиотерапии [19,28].
Признанным остаётся и тот факт, что тамоксифен оказывает эстроген подобное действие на ряд систем организма, включая костную ткань и липиды крови [12,19,29,48,72,81,88]. Кроме того, обладает антигонадо-тропными свойствами и подавляет синтез простагландинов в опухолевой ткани [1,14,50,52]. Также есть данные, что тамоксифен вызывает апоптоз опухолевых клеток [53,70,80].
Проведенные в 90-х годах исследования английской компании Enact Pharma показали наличие не только антиэстрогенных свойств тамоксифена (Z-изомера), но и эстрогенных свойств Е-изомера, обуславливающих доброкачественные образования эндометрия.
16