5
6
6
7
8
9
9
10
10
10
11
12
12
13
14
17
19
21
23
25
27
28
31
34
35
37
39
40
40
41
41
42
2
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ
Актуальность работы
Цель и задачи исследований
Научная новизна исследований
Практическая значимость исследований
Основные положения диссертационной работы,
выносимые на защиту
Апробация работы
Публикации
Личный вклад соискателя Структура и объем работы ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Представления о строении поверхностных структур
бактериальных клеток
Строение клеточной стенки бактерий
Особенности строения клеточной стенки
грамположительных бактерий
Особенности строения клеточной стенки
грамотри цательных бактерий Строение цитоплазматической мембраны Структура бактериальных спор
Основы взаимодействия дезинфектантов с бактериями Основные классы соединений, применяемых в системе общих противоэпизоотических мероприятий, их физикохимические свойства, механизм действия и антимикробная активность
Гидроксилсодержащие ароматические соединения
Галоиды - хлор- и йодсодержащие соединения
Окислители
Спирты
Альдегиды
Поверхностно-активные вещества
Сложные эфиры
Лактоны
Кислоты
Щелочи
Соли тяжелых металлов
Требования, предъявляемые к дезинфицирующим препаратам, применяемым при проведении общих противоэпизоотических мероприятий
и> и> ы ы
Оглавление
3
.4. Заключение по обзору литературы 43
Собственные исследования 45
.1 Материалы 45
.1.1 Штаммы микроорганизмов 45
3.1.2 Животные 45
3.1.3 Культуры клеток, питательные среды, растворы, реактивы 45
3.1.4 Лаботраторное оборудование 46
3.1.5 Тест-объекты 46
3.2 Методы 47
3.2.1 Микробиологические методы 47
3.2.1.1 Подготовка бактериальных культур к работе 47
3.2.1.2 Определение бактериостатической, бактерицидной и 48
спороцидной концентраций препаратов
3.2.1.3 Определение динамики бактерицидной активности 48
3.2.2 Вирусологические методы 48
3.2.2.1 Изучение вирулицидного действия препаратов на культуре 49
клеток
3.2.2.2 Изучение вирулицидного действия препаратов на куриных 49
эмбрионах
3.2.3 Изучение обеззараживающей активности препаратов 50
3.2.3.1 Изучение бактерицидных свойств препаратов на 50
батистовых тест-объектах
3.2.3.2 Изучение бактерицидной активности соединений при 51
обеззараживании поверхностей
3.2.4 Токсикологические методы 52
3.2.4.1 Определение МПД для культур клеток 53
3.2.4.2 Определение МПД для куриных эмбрионов 53
3.2.4.3 Изучение острой токсичности препаратов 53
3.2.5 Определение срока годности рабочих растворов изучаемых 54
соединений
3.2.6. Электронная микроскопия 54
3.2.7. Физико-химические свойства азаадамантанов 55
3.2.8 Статистическая обработка результатов 58
3.3. Результаты собственных исследований 60
3.3.1. Скрининг производных азаадамантанов по антимикробной 60
активности
3.3.2. Изучение спектра антимикробного действия 68
тетраазадигомоадамантана и его производных
3.3.2.1 Бактерицидная активность тетраазадигомоадамантана и 68
его 2п- и МНз-содержащих производных
3.3.2.2 Спороцидная активность тетраазадигомоадамантана и его 73
и ЫНз-содсржащих производных
3.3.2.3 Вирулицидная активность тетраазадигомоадамантана и его 74
Ъп- и ЫНз-содержащих производных
3.3.2.4 Изучение активности тетраазадигомоадамантана и его Ъп- 77
Обзор литературы
13
защищают содержимое бактерий от воздействия внешних повреждающих факторов [Н.М.Колычев, 2003; И.Б.Павлова, 2007; В.Н.Кисленко,
Н.М.Колычев, 2007].
2.1.1 Строение клеточной стенки бактерий
Клеточная стенка - один из главных структурных элементов бактериальной клетки, служит для поддержания формы клетки и предотвращает ее лизис от осмотического шока [Э.Рис, 2002; В.Т.Емцев, 2005; К.В.Шпынев и др., 2007]. Толщина клеточной стенки колеблется от 20 до 100 нм и более и составляет около 20% сухого вещества бактериальной клетки. Клеточная стенка относительно проницаема для крупных молекул. Она связана с цитоплазматической мембраной соединительными тяжами — «мостиками» [Д.А.Васильев, 1983; Э.Рис, 2002; В.Т.Емцев, 2005;
А.Злыгостев, 2006; В.Н.Кисленко, 2006].
Основу стенки бактериальной клетки составляет структурный полимер, обозначаемый как муконептид, глюкозаминопептид, пептидогликан или муреин (от лат. тише - стенка) [Б.В.Громов, 1984; С.В.Сидоренко, 2000;
Э.Рис, 2002; Н.М.Колычев, 2003; Е.А.Голов, 2005; В.Т.Емцев, 2005]. Наличие в клеточных стенках пептидогликанового слоя - характерная особенность прокариот. Исключение составляют только архебактерии и микроорганизмы немногих других групп и видов [С.В.Сидоренко, 2000; В.И.Тпкунов, 2000]. Пептидогликан - это гетерополимер, в котором чередуются производные глюкозы - И-ацетилглюкозамин и И-ацетилмурамовая кислота (Ы-ацетилглюкозамилактат), соединенные между собой р-1,4-гликозидными связями [Б.В.Громов, 1984; Э.Рис, 2002; Е.А.Голов, 2005]:
Основу пептидной части муреина составляют тетрапептиды,
образованные чередующимися Ь- и Б-аминокислогами. В состав
тетрапептида часто входит также необычная аминокислота —
диаминопимелиновая (ДА1І), находящаяся в мезоформе. В составе пептида
Обзор литературы
14
ДАП обычно связана своим Ь-асимметричным центром [Б.В.Громов, 1984;
Н.М.Колычев, 2003; Е.А.Голов, 2005; В.Т.Емцев, 2005].
Благодаря карбоксильным группам мурамовой кислоты бактериальный гликан, в отличие от целлюлозы и хитина, обладает кислотными свойствами, что определяет ряд таких важных свойств бактериальной оболочки как проницаемость для солей и других низкомолекулярных соединений [Б.В.Громов, 1984; Е.А.Голов, 2005].
2.1.1.1 Особенности строения клеточной стенки грамположительных бактерий
Строение оболочки у грамположительных (фирмакутных) бактерий довольно разнообразно, но она всегда массивна, а се толщина варьирует от 20 до 100 нм [Д.А.Васильев, 1983; Н.М.Колычев, 2003; Е.А.Голов, 2005;
А.Злыгостев, 2006; В.Н.Кисленко, 2006; И.Б.Павлова, 2007]. У многих видов этих бактерий оболочка образована многослойным пептидогликаном, с которым ковалентно связаны вторичные полимеры — тейхоевые и тейхуроиовые кислоты или нейтральные полисахариды. Такая оболочка может быть однородной [Н.А.Радчук и др., 1991; Н.М.Колычев, 2003; Е.А.Голов, 2005; В.Т.Емцев, 2005; А.Злыгостев, 2006; К.В.Шпынев и др., 2007] (рис. 2).
Рис, 2.Схематнческое строение внешних структур грамположительных (а) и грамотрицательных (б) микроорганизмов: ЦМ - цитоплазматическая мембрана, ГТГ -пептидогликан, ВМ - внешняя мембрана, ЛФ - липидный франмент липополисахарида, 11C - полисахаридная цепь, ПК - пориновые каналы, ТК - слой тейхоевых (липотейхоевых, тейхуроновых) кислот.
Пептидогликан составляет 40-60%, сухой массы клеточной стенки, но у некоторых видов, как, например, у Micrococcus lyzodeirticus - 80-90%. Характерная для многих бактерий толщина клеточной стенки в 30-40 нм (например у Bacillus sublilis) соответствует толщине приблизительно 40 молекул пептидогликана [Б.В.Громов, 1984; Э.Рис, 2002; Е.А.Голов, 2005]. У
- Киев+380960830922