ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Методологические подходы к формированию содержания и структуры планируемой работы с программированием последовательности этапов ее выполнения, а также методов клинической оценки результатов определялись поставленной целью и задачами исследования. При формулировке задач, определяющих конечный результат проводимого исследования, применен метод системного анализа (В.А.Лекач, 1994). Суть системного подхода состояла в том, что первоначально определялся объект исследования, как один из элементов системы с обязательной оценкой степени его воздействия на другие элементы и систему в целом. По каждому из исследуемых элементов системы выявлялись "слабые" звенья, воздействие на которые позволяло оптимизировать планируемый результат. При этом работоспособность системы в целом определялась наличием совокупности элементов в их определенной взаимосвязи.
Системный подход использован при формировании, выполнении и анализе как экспериментального, так и клинического разделов исследования, в которых использованы в динамике стандартные клинико-лабораторно-инструментальные методы исследования, а также ряд специальных методик, описанных ниже.
2.1. Материалы и методы экспериментальных исследований
Метод системного анализа использован при решении задач экспериментального раздела исследований и определил выполнение основных этапов этой работы в строго определенной последовательности:
- разработка модели нагноившейся ПНКПЖ в целях изучения ее патогенеза, клинического течения и путей лечения;
- использование модели ПНКПЖ для оптимизации способа лекарственного некролизиса очагов гнойно-некротической деструкции в ПЖ и ППК с помощью комбинированного состава мазей Левосин и Офлотримол-П.
Моделирование нагноившейся ПНКПЖ с переходом в панкреатический свищ (описание разработки способа приведено в разделе 3) выполнено на собаках черной и рыжей масти массой тела 12-20 кг в возрасте 5-6 лет (возраст собак определяли по таблице И.П.Западнюка с соавт., 1974). Исследования проводились в период позволяющий исследования на собаках. Животные содержались в виварии Крымского государственного медицинского университета, где предварительно выдерживались на карантине (30 суток), во время которого им делали прививки от бешенства и проводили дегильментизацию.
Операции на собаках выполняли в условиях общего обезболивания. Анестезиологическое пособие проводилось по следующей схеме: для премедикации внутримышечно вводился атропин (0,01мг/кг) и ветранквил (1мг/кг). Путем венесекции устанавливался катетер в периферическую вену, для вводного наркоза использовался 1% раствор тиопентала натрия (10мг/кг) до достижения III2 стадии наркоза по Гведелу (миоз, выход третьего века до 2/3). При этом не допускалось апноэ, на самостоятельном дыхании производилась интубация трахеи трубкой с манжеткой. Вводили деполяризующие миорелаксанты: дитилин (0,5мг/кг, в дальнейшем - 0,5-0,8мг/кг в час). ИВЛ проводилась аппаратом РО-6-03 в режиме нормовентиляции из расчета 200-250 мл на кг в мин., с частотой 14-16 вдохов в минуту. Анестезия поддерживалась дробным введением фентанила (0,04 мкг/кг в час) и кетамина (5мг/кг в час). Во время анестезии осуществлялся кардиомониторинг прибором ЭКСП-03, контроль АД, ЧСС. Вводились кристаллоиды из расчета 20мл на кг в час, поступление наркозных средств прекращалось за 20-30 минут до окончания операции. После восстановления адекватного самостоятельного дыхания ИВЛ прекращалась. По восстановлению тонуса мышц, ротоглотки животное экстубировалось.
Рис.2.1.1. Схема эксперимента
Серия экспериментов (Рис.2.1.1) по моделированию осложненной нагноением ПНКПЖ выполнена на 15 собаках. На 5 из них проведена отработка элементов собственной методики и техники моделирования осложненного ПНКПЖ; основное внимание было уделено определению опытным путем "оптимальных" размеров выделяемой из ПЖ дольки с обязательным сохранением ее кровоснабжения для обеспечения полноценной внешнесекреторной функции. Основную группу исследований составили 10 собак с экспериментальной моделью ложной кисты ПЖ, осложненной прогрессирующим нагноением. Комплексно (клинико-лабораторно) по срокам наблюдения изучалось содержимое и стенка кисты, ее возможная связь с протоковой системой ПЖ, а также эффективность лечения мазями Левосин (5 собак) и Офлотримол-П (5 собак); контрольную группу по оценке течения ПНКПЖ без местного лечения составили 2 собаки; одна из 10 собак погибла на этапе моделирования кисты от острой сердечной слабости (передозировка наркоза?).
При моделировании нагноившейся ПНКПЖ в целях профилактики панкреонекроза интактной ткани поджелудочной железы животным в течение 3 суток проводили стандартную внутривенную терапию путем введения солевых растворов, глюкозы с 5-фторурацилом, папаверина, натрия хлористого, а также аминокапроновой кислоты.
В послеоперационном периоде собаки голодали в течение 3-х дней, на 4-е сутки они получали жидкий рацион; с 5-х суток животных переводили на обычный пищевой режим.
Комплексная оценка результатов моделирования нагноившейся ПНКПЖ включала в себя использование методов комплексного (клинико - лабораторно - инструментального) исследования. Помимо клинического анализа крови и мочи по срокам наблюдения: до начала опыта, а также
- на 1, 3 и 6 сутки у животных с моделью осложненного нагноением ПНКПЖ;
- на 2, 4 и 6 сутки от начала местного лечения гнойно-некротического процесса мазями Левосин и Офлотримол-П производили забор крови из вены для биохимического исследования. Уровень активности амилазы в сыворотке крови определяли по Каравею, билирубина - по Иендрашеку, АСТ и АЛТ - по Райтману и Френкелю, щелочную фосфатазу - по Кингу, креатинин - по Попперу, мочевину - по цветной реакции с диацетилмонооксином. Биохимически изучали содержимое кисты через 1 месяц после моделирования, одновременно проводили его цитологическое исследование; аналогич