РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В соответствии с целью и задачами, нами был проведен эксперимент на 180 крысах линии Вистар, отличающихся от беспородных однотипными реакциями на внешнесредовые воздействия. Это позволяет в течение короткого промежутка времени проследить возрастные закономерности морфологических особенностей легких под влиянием интересующих нас факторов [211].
Комиссией по биоэтике Крымского государственного медицинского университета (протокол № 6 от 23 октября 2007) установлено, что проведенное научное исследование отвечает этическим требованиям в соответствии с приказом МОЗ Украины от 01.11.2000 г.
Согласно схеме нашего опыта (табл. 1), все животные были распределены на 3 возрастные группы для решения определенных экспериментальных задач, соответственно:
- I группа неполовозрелых крыс - 2 месяца с исходной массой 120-130 г.;
- II группа половозрелых крыс - 6 месяцев с исходной массой 220-240 г.;
- III группа старых крыс- 12-14 месяцев с исходной массой 300 - 330 г.
Все возрастные группы состояли из 5 серий, по 12 животных в каждой. В первую серию (контрольную) вошли животные не подвергающиеся в течение всего экспериментального периода гравитационным перегрузкам и находящиеся в стандартных условиях вивария.
В серию 1 (контрольную) вошли животные, не подвергающиеся в течение всего экспериментального периода гравитационным перегрузкам и находящиеся в стандартных условиях вивария. В связи с тем, что условия эксперимента предусматривали наличие таких побочных факторов как вибрация, шум и отсутствие освещения внутри центрифуги, для обеспечения исследования непосредственного влияния именно гипергравитации, животные контрольных серий находились в момент эксперимента в однотипных, светонепроницаемых, пластиковых контейнерах, на верхней плоскости центрифуги.
Таблица 2.1.
СХЕМА ЭКСПЕРИМЕНТА.
ГруппаСерияДлительность экспериментаМассаКоличество животных10 дней30 днейI группа
(неполо-возрелые)
Серия 1
контрольАБ120-130 гр.12 Серия 2
нагрузки АБ12Серия 3
нагрузки + защитаАБ12Серия 4
Нагрузки+фарм.корр.АБ12Серия 5
Нагрузки+защита+фарм. корр.АБ12II группа
(половозре-лые)
Серия 1
контрольАБ220-240 гр.12Серия 2
нагрузки АБ12Серия 3
нагрузки + защитаАБ12Серия 4
Нагрузки+фарм.корр.АБ12Серия 5
Нагрузки+защита+фарм. корр.АБ12III группа
(период старческих изменений)Серия 1
контрольАБ300-330 гр.12Серия 2
нагрузки АБ12Серия 3
нагрузки + защитаАБ12Серия 4
Нагрузки+фарм.корр.АБ12Серия 5
Нагрузки+защита+фарм. корр.АБ12 В серию 2 мы включили животных, которые подвергались воздействию гравитационных перегрузок. Перегрузки создавались при помощи экспериментальной центрифуги ЦЭ-2/500 с радиусом 0,5 м и рабочим диапазоном от 1 до 50 g. Величина перегрузки составляла 9 g., градиент нарастания составлял 1,4-1,6 ед/с., спада - соответственно 0,6-0,8 ед/с. Эксперимент проводился ежедневно, в одно и то же время, в течение 10 мин. Перегрузки моделировали в виде трёх временных промежутков, длительностью по 3 минуты каждый с интервалом между ними в 30 сек. Для обеспечения стандартных условий животные 2 серии помещались в специальные пластиковые контейнеры, что давало возможность фиксировать всех крыс в одинаковой позиции - головой по ходу движения. В серию 3 вошли животные, подвергающиеся воздействию идентичных перегрузок, но находящиеся в условиях предлагаемой нами физической защиты. Крыс помещали в герметичный пластиковый контейнер, обеспеченный системой вентиляции, который в свою очередь помещался в металлический цилиндр, заполненный водой. Прототипом метода физической защиты был взят иммерсионный способ физической защиты биологических объектов при воздействии гравитационных перегрузок, который заключается в погружении животного в жидкую среду [212, 213].
Четвертую серию составили животные, подвергавшиеся воздействию гравитационных перегрузок при применении фармакологической коррекции. Фармакологической коррекцией являлось парентеральное введение глютаргина - препарата, в состав котрого входят L-аргинин и глютаминовая кислота (фармацевтическая компания "Здоровье", г. Харьков), в дозировке 100 мг/кг веса животного непосредственно перед воздействием гипергравитации. Выбор данного препарата был обоснован его механизмом действия. Проведенный анализ литературы показал, что в механизме адаптации к экстремальным условиям вовлекается нетрадиционный нейромедиатор NO и нейропептиды, а повышение мощности NO-продуцирующих систем, очевидно, лежит в основе адаптивной стойкости к острой гипоксии, ишемии и тяжелым физически нагрузкам [189, 190].
Животные 5 серии находились под воздействием гравитационных перегрузок в условиях физической защиты и фармакологической коррекции одновременно.
В зависимости от срока эксперимента животные каждой серии были распределены на 2 подгруппы. В подгруппу А вошли крысы подвергающиеся воздействию гравитационных перегрузок в течение 10 дней, а подгруппу Б составили животные, находящиеся в эксперименте 30 дней (табл. 2.1).
В ходе эксперимента животных содержали в стандартных условиях вивария. Наблюдали за общим состоянием и поведением животных, массу тела контролировали с интервалом в 3 дня. Во всех возрастных группах особых различий в динамике прироста массы выявлено не было.
Эксперимент выполняли в соответствии с правилами Европейской конвенции защиты позвоночных животных, использующихся в экспериментальных и других научных целях [214-216].
Содержание и кормление животных осуществлялось в соответствии с научно-практическими рекомендациями по содержанию лабораторных животных [217].
При завершении сроков эксперимента (10 дней и 30 дней) животных выводили из эксперимента методом декапитации под эфирным наркозом и проводили забор органов. Забой животных осуществляли в соответствии с "Правилами проведения работ с экспериментальными животными" [218].
После выделения легкие
- Київ+380960830922