2
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
ВИК • перевиваемая (постоянная) клеточная культура почки хомячка;
ФБР - фосфатно-буферный раствор:
АЭЭИ - аминоэтилэтиленимин;
ДЭИ - димер этиленимина;
ЬП - культура клеток бычьей почки;
СП- культура клеток свиной почки;
ФА - феракоил;
ЛДм - пятидесятипрсцентная летальная доза;
ВНИЯИ - Всесоюзный научно-исследовательский ящурный институт; ВНИИЗЖ - Всероссийский научнс-исследовательный институт защиты животных;
ГОА - гидроокись алюминия:
ИД» - пятидесятипроцентная инфекционная доза;
ИмД*. - пятидесятипроцентная иммунизирующая доза;
КРС - крупный рогатый скот; лог: - логарифм при основании -2;
ВНА - вируснейтрализующие антитела;
ТЦД» - пятидесятипрсцентная цитопатическая доза:
РСК - реакция связывания комплемента;
1й - логарифм при основании -10;
.1.1 - индекс иммуногенности;
М.м. - молекулярная масса:
ПЗБ - Покровский завод биопрепаратов;
ПЭГ - попиэтиленгликоль;
ПАК - полиакриловая кислота;
УФЛ - ультрафиолетовые лучи;
ЧДК - диплоидные клетки человека;
\'его - культура клеток почки зеленой мартышки;
СИЛ - бетапропиолактсн; \
А'ГЧ ~ ЪЦСт*тут $ря воХР/1неН*5> (СшИ)
з
СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ .......................................................... 5
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ................................................. 10
2.1. Общая характеристика бешенства ................................ 10
2.2. Вирус бешенства и его свойства ................................ 12
2.3. Вак'цинопрофилактика бешенства ................................ 15
2.3.1. История создания вакцин против бешенства .................. 15
2.3.2. Современные вакцины против бешенства......................
их достоинства и недостатки ................................ 18
2.3.3. Пути улучшения качества антирабических вакцин............. 24
- Подбор системы культивирования вируса бешенства; ........ 24
- Очистка и концентрирование вируса бешенства: ............... 29
- Инактивация вируса и инактиванты: .......................... 30
- Аоъюванты и их использование в антирабических вакцинах: .... 33
2.3.4. Определение качества вакцин против бешенства .............. 34
2.4. Заключение по обзору литературы ............................... 42
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ......................................... 50
3.1. Материалы и методы ............................................ 50
3.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ........................... 56
3.2.1. Репродукция вируса бешенства в культурах клеток ........... 56
3.2.2. Сравнительное изучение иммуно-биологических свойств вируса бешенства, репродуцированного в монослойной и суспензионной культурах клеток ВНК-21 ........................................ 60
3.2.3. Подготовка посевного вируса бешенства при культивировании вируса в больших объемах......................................... 61
3.2.4. Динамика накопления вируса бешенства при культивировании в суспензионной культуре клеток ................................... 64
12
2.2. Вирус бешенства и его свойства
Вирус бешенства относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus, Рабдовирусы - это большая группа вирусов, выделенных от позвоночных животных, членистоногих и растений.
Известно более 40 рабдовирусов животных. Важнейшая группа рабдовирусов представлена вирусом бешенства (Rabies (англ.), Toilwnut (нем.), Lyssa, La Rage (франц.), Rabia (исп.). Штаммы вируса бешенства неоднократно выделяли от собак, больных людей и диких животных.
Большинство вирионов имеют форму пули с одним круглым одним плоским концом. Длина и диаметр вирусных частиц варьирует в больших пределах и в среднем составляет 180 х 75 нм. Вирус состоит из волокнистого ядра, окруженного двумя мембранами различной плотности. Поверхность вириона имеет выступ длиной 6-7 нм и диаметром 4,5-5.5 нм.
На плоском конце вириона. имеется осевая полость глубиной не более 1/3-1/5 его общей длины (44).
Плотность вируса составляет 1.16-1,20 г/см1. Константы седиментации -550-650S, молекулярная масса 475 х 10е Дальтон.
РНК вируса бешенства имеет молекулярную массу 4.6 х 10s Дальтон, что составляет 2% массы вириона. Геном представлен единой нефрагментирован-ной молекулой нуклеиновой кислоты (минус нить), что и объясняет отсутствие биологической активности у РНК. выделенной из вируса бешенства.
Длина РНК вируса 460 нм. константа содиментации 45S. плавучая плотность 1.66 г/см3 (63, 96).
PH К-вируса бешенства соединена с белками, которые позволяют ей свободно образовывать спиральные витки, формировать структуру, именуемую рибонуклеокапсидом (РНП) или нуклеокапсидом (НК), составляющий 14% общей массы вириона. РНП вируса бешенства состоит из РНК (4%) и белка (96%). Плавучая плотность нуклеокапсида 1.32 г/см3, константа седиментации 200S (Сокол-23). В составе вируса бешенства 5 отдельных полипептидов
13
Их молекулярные массы 420-45С тыс.Дальтон (90).
Нуклеокапсид вируса бешенства представлен в виде спирального тела, состоящего из белков N. N5 и Ь. Белок Ы-вирионной РНК защищает ее от действия РНКаэы. Высокомолекулярный белок I и небольшой белок N8 не связаны с нуклеокапсидом и содержатся в вирионе в незначительных количествах. Внутренним белком вирусной оболочки является негликозилированный мембранный или матричный (М) белок. Кроме белка М у вируса бешенства в состав внутреннего слоя оболочки входит белок А или клеточный актин (63).
После расщепления вируса бешенства додецилсульфатом № были идентифицированы пять протейное, сумма молекулярных масс всех белков 420-450 Кда (44. 59, 63). Рибонуклеопротеин содержит геномную РНК. связанную с тремя внутренними протеинами: транскриптазой (1_) (М.м. = 190С00), нуклеопротеинам (М) (М.м.=55000) и фосфолротеином (N8)
(М.м.=38000). Эти протеины вместе с РНК образуют активный РНК-комплекс, который контролирует как транскрипцию, так и репликацию (83).
Вирус бешенства и родственные ему вирусы (Лагос, Мокала, Дьюеенхейдж) имеют одинаковую структуру генома. Из трех белков, образующих вместе с РНК спиралевидный нуклеокапсид. основным внутренним белком вируса является Ы-белок. Он является основным антигеном, обладающим способностью стимулировать перекрестные реакции между вирусами бешенства и другими родственными ему вирусами (90, 96. 98 и др.).
В состав наружного слоя оболочки вирионов бешенства входит гликопротеин Э (65-80 Кда). негликозилированная гидрсфобная часть которого погружена в липидный бислой. Он составляет 44-47% от общего количества белка. Гликопротеин играет ведущую роль в приклеллении вирионов к мембране клетки за счет связывания с никотин-ацегилхалиновыми рецепторами клетки (97). Гликопротеин определяет типовую специфичность лиссавирусов и обуславливает гемагглютинирующую активность вируса бешенства (83).
- Київ+380960830922