2
СОДЕРЖАНИЕ
стр.
ВВЕДЕНИЕ 4
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
1.1. Гидролиз белков в тонкой кишке высших животных 9
1.1.1. Форма, в которой происходит всасывание белков 9
1.1.2. Структурная организация слизистой оболочки тонкой кишки 14
1.1.3. Локализация пептидгидролаз в тонкой кишке и характеристика ферментного спектра тонкой кишки 16
1.1.4. Распределение активности пептидгидролаз в тонкой кишке 20
1.2. Псптидгидролазы толстой кишки, печени и почек 24
1.3. Пептиді идролазы тонкой и толстой кишки, печени, почек
при патологии мембранного пищеварения 27
1.4. Этиология и патогенез расстройств желудочно-кишечного тракта у поросят 32
1.5. Профилактика и лечение расстройств желудочно-кишечною тракта у поросят 39
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 44
2.1. Материалы и методы исследования 44
2.1.1. Подопытные животные и их характеристика 44
2.1.2. Условия проведения опытов 45
2.1.3. Определение активности аминопептидазы М 46
2.1.4. Определение активности дипептидаз 47
2.1.5. Определение содержания белка 48
2.1.6. Определение термостабильности ферментов и влияния модификатора трибу шрина на ферментативную активность дипептидаз 50
2.2. Активность пептидгидролаз тонкой и толстой кишки 50
2.2.1. Активность аминопептидазы М и дипептидаз топкой и толстой кишки у здоровых и больных поросят 1 -дневного возраста 51
2.2.2. Активность аминопептидазы М и дипептидаз тонкой и толстой кишки у здоровых и больных поросят 7-днсвного возраста
2.2.3. Активность аминопептидазы М и дипептидаз тонкой и толстой кишки у здоровых и больных поросят 14-дневного возраста
2.2.4. Активность аминопептидазы М и дипептидаз тонкой и толстой кишки у здоровых и больных поросят 30-дневного возраста
2.2.5. Активность аминопептидазы М и глициллейциндипеп-тндазы тонкой и толстой кишки у поросят 30-дневного возраста после лечения
2.2.6. Возрастная динамика активности аминопептидазы М и глициллейцнндипептидазы гонкой и толстой кишки
у здоровых и больных поросят
2.3. Активность аминопептидазы М и дипептидаз печени и почек у здоровых н больных поросят 1-, 7-, 14- и 30-дневного возраста и поросят 30-дневного возраста после лечения
2.4. Термостабильность ферментов и влияние модификагора трибутирина на ферментативную акгивнос гь дипептидаз
2.4.1. Термостабильность аминопептидазы М
2.4.2. Термостабильность глнциллейциндипеитидазы
2.4.3. Влияние модификатора трнбутирнна на активность глициллейцинди пептидазы
2.5. Гистологические исследования стенки тонкой и толстой кишки у поросят
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИ И ЛИТЕРАТУРА
17
свойств и функциональным показателям (Кушак Р.И., Уголев А.М., 1966; Кушак Р.И., 1983; Kim Y.S., 1977).
Предполагается, что мембранные пептидазы участвуют в пищеварительных процессах, а цитозольные - во внутриклеточном обмене (обзор: У голев
А.М., 1991; Тимофеева Н.М., 1993; Kim Y.S., а. а!., 1973; Alpcrs D.H., 1987).
Мембраносвязанные пептидазы локализованы в области апикальной мембраны щеточной каймы. Показано, что они синтезируются в эндоплазмати-ческой сети энтероцита и затем встраиваются в мембрану. Включение в состав липопротеиновой мембраны необходимо для функционирования этих ферментов (Burke Т. a. al, 1988; Holmes R.. Loblcy RAV., 1989; Erickson R.H., Kim Y.S. 1990).
Мембранные ферменты являются интегральной частью мембраны микроворсинок, они состоят из гидрофильного и гидрофобного доменов (частей). Это установлено у ряда кишечных ферментов: аминопептидазы, мальтаз, щелочной фосфатазы, гамма-амил азы и других. Г идрофильный домен является каталитическим активным центром, высту пающим в полость тонкой кишки. Гидрофобная часть фермента пронизывает мембрану насквозь и, взаимодействуя с фос-фолипндным матриксом мембраны, выполняет якорную функцию.
В отношении днпептндаз есть предположение, что они могут быть периферическими, т.е. частично включенными в фосфолнпидный бислой мембраны. Возможно этим объясняется их спонтанная солюбилизация (Смирнова Л.Ф. и др., 1976; У голев Л.М. и др., 1992; Тимофеева Н.М., 1993, 1998; Holmes R., Lo-bley RAV., 1989; Lindberg T. a. al., 1975).
Кишечные амино-, ди- и трипептидазы я&пяются экзопептидазами, они отшепляют аминокислоты с N- и С-конца пептидов (Мосолов В.В., 1971; Peters T.J., 1972; Wiseman G., 1974).
Наиболее важным ферментом, реализующим свое действие на поверхности мембран щеточной каймы энтероцитов считается аминопептндаза М. Она обладает широкой субстратной специфичностью и отщепляет нейтральные и
18
основные аминокислоты от молекул белковых субстратов. Каталитическая активность обусловлена обязательным присутствием цинка. На долю этого фермента приходится 8% общего количества белка щеточной каймы (обзор: Уголев
А.М., 1985). В тонкой кишке обнаружена также аминопептидаза А, специфичность которой проявляется к соединениям, содержащим остатки аспаргнновон и глутаминовой кислот. Показано, что фермент из тонкой кишки свиней обладает четвертичной структурой и высокой молекулярной массой и составляет 4% от общего количества белка мембраны энтероцитов (Пашс1ясп Е.М. а. а1., 1980).
Аминопептидаза Р, связанная с мембранами щеточной каймы, была выделена из гомогената тонкой кишки крысы (МаОДтоЮ Н. а. а1„ 1989). Фермент расщепляет М-термииальную связь в пролнновых пептидах. Нго активность максимальна в средней части тонкой кишки и минимальна в дистальной, что напоминает распределение аминопептидазы М.
Гидролиз пептидов в области щеточной каймы осуществляют еще ряд ферментов.
Эндопептидаза расщепляет пептидные связи между гидрофобными аминокислотами.
Гидролиз пролинсодержащих пептидов, которые не расщепляются панкреатическими ферментами, осуществляется четырьмя кишечными пептидазами. Дипептиднламинонснтидаза и аминопептидаза Р отщепляют иролиновые пептиды с амино'терминального конца молекулы, в то время как ангиотензин-конвертнруемый фермент и карбоксипептидаза Р - с карбоксильного конца (УовЫока М. а. а1., 1988; МаКитоЮ 11. а. аЦ 1989).
Появились работы, в которых мембраносвязанные ферменты были обнаружены также и в цитозольной фракции ( Егорова В.В. и др.. 1998; Ке1яепаиег
А.М. а. а1., 1992).
Показано (Егорова В.В. и др.. 1998), что у аминопептидазы М, которая является типичным мембранным ферментом, существует растворимая форма.
- Київ+380960830922