ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение 2
1. Обзор литературы 8
1.1. Патогенность, факторы патогенности и персистенция микроорганизмов в организме хозяина 8
1.2. Реализация иммунитета. Современные представления о механизме взаимодействия клеток иммунной системы. Молекулы адгезии в межклеточном взаимодействии. Цитокины 17
1.3. Специфическая профилактика при бруцеллезе 23
1.4. Несиецифичсская стимуляция иммунитета 29
1.5. Генотоксическое действие вакцин 32
2. Собст венные исследования 35
2.1. Материалы и методы. 35
2.2. Испытание прогивобруцеллезных вакцин, полученных различными способами 42
2.2.1. Испытание вакцины, полученной методом облучения. 42
2.2.2. Иммуноморфологическая и морфолог ическая характеристика вакцинною процесса, вызванною различными вакцинами. 47
2.2.3. Испытание прогивобруцеллезных вакцин в сочетании с липосомами. 65
2.2.4. Изучение иммунитета, создаваемого облученной противобру-целлезной вакциной в сочетании с иммуностимуляторами 84
2.2.5. Изучение возможности использования токоферола в виде иммуностимулятора, но уже в сочетании с бруцеллезной химической вакциной 95
3. Обсуждение результатов 106
4. Выводы. 129
5. Практические предложения и рекомендации 130
6. Список литературы 131
1
Введение
Актуальность темы. История борьбы с бруцеллезом животных в бывшем СССР и в том числе в Российской Федерации четко подтверждает исключительно важную роль специфической профилактики. Благодаря массовой иммунизации скота в зонах широкого распространения бруцеллеза и особенно по научно разработанным во ВННИБТЖ, ИЭВС и ДВ. ВИИВИ (г. Казань) схемам, бруцеллез перешел в разряд контролируемых и управляемых ветеринарной службой инфекций. Динамика снижения заболеваемости бруцеллезом указывает на перспективу полного оздоровления страны в ближайшем будущем.
Отдавая должное специфической профилактике бруцеллеза, следует указать, что массовая иммунизация животных всех половозрастных групп, тем более неоднократная. живыми противобруцеллезными вакцинами в полной мере оправдывает себя лишь в условиях широкого распространения инфекции, когда создается большая угроза перезаражения животных.
Известно, что противобруцеллезная - достаточно иммуиогенная вакцина из штамма 82 в силу своей нестабильности, вирулентности, абортогенности далеко небезопасна для организма крупного рогатого скота, у которого вакцинный процесс протекает по типу малой инфекции, а в случае, если она используется на ин-тактньгх в отношении антигена бруцелл животных, вакцинный процесс может быть аналогичен инфекционному со всеми вытекающими отсюда последствиями (аборты, серологические реакции в высоких титрах).
Попытки использовать для специфической профилактики стабильные про-тивооруцеллезные вакцины из авирулентных S-форм бруцелл В.abortus (19, 104-VI и др.) не оправдывают себя в силу выраженной агглютиногенности. Кроме того, живая противобруцеллезная вакцина В.abortus из штамма 19 влияет на хромосомный аппарат лейкоцитов крови привитых животных (т.е. обладает лейкемогенно-стью). что в ряде случаев приводит к появлению клонов клеток с измененными ка-риотипами, а это, на фоне ухудшевшейся экологической ситуации и роста числа имму но дефицитных состояний в животноводстве, вызванных распространением
В составе мембранных липидов у бруцелл преобладает октадецеиовая, цик-лопропаиовая, пальмитиновая и стеариновая жирные кислоты (З.П. Васюрснко с соав., 1977; S.B. Dees et al., 1984), что по мнению вышеназванных авторов является важным таксономическим признаком бактерий рода Brucella.
В наружной мембране бруцелл установлено присутствие трех основных qnnn белков с молекулярной массой 88-94; 35-40; 25-30 тыс. дальтон (A.J. Winter, 1987).
Л.М. Алимов с соавт. (1997) при разгонке лизатов бруцелл в полиакриловом геле установили в их составе до 68 фракций полипептидов, с молекулярной массой от 10 до 530 Ед. Большая часть полипептидов распределялась в зоне с молекулярной массой от 10 до 80 кД. При сравнительном изучении полипептидных профилей штаммов бруцелл у культур, имеющих S-форму, обнаружилось 68-56 полипептид-ных фракций, у SR-штаммов - 51-50 и у R-штаммов - 45 фракций.
Химический состав пептидогликана бруцелл схож с другими грамотрица-тельными бактериями, содержит глюкозамин, аланин, глютаминовую и другие кислоты. Пептидогликан состоит из полисахаридных цепей и пептидных мосгиков, объединяющих всю структуру в единый «мешок», окружающий бактериальную клетку снаружи. Полисахаридные (гликановые) цепи образованы чередованием двух «кирпичей» - азотосодержащих производных глюкозы: N-ацетишлюкозамина и М-ацетилмурамовой кислоты и в целом представляют хитиноподобную структуру. Это интересно с эволюционной точки зрения так как хитин и хитиноподобные структуры широко распространены почти у всех представителей животного мира (исключая только растения) и являются одними из наиболее распространенных на Земле биополимеров.
С троение гликановых цепей пептидогликана большинства бактерий одинаково. Пептидная часть существенно различается. Однако во всех случаях она образована из 4-5 остатков L- и D-аминокислот. Эти короткие пептиды, с одной стороны, своей свободной NH2-группой соединены амидной связью с карбоксилом мура.мовой кислоты, а с другой - связаны с таким же коротким пепт идом соседней гликановой цепи (Е.П. С'авельев. Г.И. Петров, 1978; Ю.В. Езепчук, 1985; И.С. Ку-лаев, 1997).
14
О.В. Бухарин (1990, 1994. 1997) указывает, что наиболее уязвимой мишенью у патогена для защитных сил хозяина является пептидогликан.
Результаты исследований биологической функции пептидогликана в условиях симбиоза патогена с хозяином позволяют считать, что этот полимер является мощным раздражителем иммунной системы (O.V. Kalyuzhin, 1998). Выявлены антигенные детерминанты пептидогликана (Р. Siedl, K. Schiufer, 1986) объясняют, почему он оказался структурой с выраженной иммунологической активностью, далеко превосходящая другие компоненты бактериальной клетки (Ю.В. Езеггчук, 1985; О.В. Бухарин, 1997). Известно, что только грамотринательные бактерии с экранированным пептидогликаном оказались устойчивыми к действию бактерио-литических ферментов (гликозидаз, аланиламидаз, пептидаз) (И.С. Кулаев с соавт., 1984; И.Я. Захарова, И.Н. Павлова, 1985; Г.К. Скрябин, И.С. Кулаев, 1990; И.С. Кулаев. 1997; J.M. Ghuysen et al., 1994).
С целью выживания микроорганизмы используют ряд приемов: «маскировку» (механическая зашила и антигенная мимикрия), «потерю» (образование L-форм), а также «атаку» (секрецию факюров иммуносупрессии) (И.И. Домародов-ский. 1993, 1997; Б.В. Втюрин с соавг.. 1994; F. Robey, Т. Harris, 1992).
Среди экранированных структур, при помощи которых бруцеллам удается «камуфляж» пептидогликанового полимера можно указать на липополисахарид, снижающий окислительный «всплеск» у нейтрофилов и защищающий микроорганизмы от антибактериального эффекта катионных пептидов лизосом нейтрофилов (E R. Umanue cl al., 1976; L. Valette, 1984). Способность бруцелл уклоняться от встречи с профессиональными фагоцитами хозяина общеизвестна (Н. Smith, 1985; Т Е. Toth et al., 1995). В этом случае микроб старается проникнуть в иммунологи-чески малозащищенные клетки (D. l ang et al., 1996). Такой подходящей мишенью для бруцелл служат клетки плаценты.
Невозможность «замаскировать» или защитить пептидогликан бактериальной клетки иногда приводит к тому, что бактерии либо частично, либо полностью теряют его вместе с клеточной стенкой, образуя так называемые L-формы. Биологические особенности L-форм бруцелл подробно изучены (П.Д. Триленко, 1976;
В.Д. Тимаков, Г.Я. Коган, 1973: С.Р. Прозоровский с соавт., 1981; JI.H. I ордиенко,
15
- Київ+380960830922