2
ОГЛАВЛЕНИЕ
стр.
ВВЕДЕНИЕ........................................................ 5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................... 10
1.1.1. Общие сведения об аденовирусной инфекции кур 10
1.1.2. Характеристика вируса ССЯ-76...................... 13
1.1.3. Особенности эпизоотологии ССЯ-76.................. 16
1.1.4. Патогенез заболевания............................. 17
1.1.5. Клинические признаки и
патологоморфологические изменения................. 18
1.1.6. Антигенная активность и антигенное взаимоотношение штаммов вируса ССЯ-76................................ 20
1.1.7. Культивирование вируса ССЯ-76..................... 22
1.1.8. Диагностика болезни............................... 24
1.1.9. Иммунитет и специфическая профилактика ССЯ-76 24
1.1.10. Основные принципы конструирования вакцин
против ССЯ-76..................................... 31
1.2. Адъюванты и их использование в составе вакцин............. 33
1.2.1. Минеральные адъюванты............................. 33
1.2.2. Масляные адъюванты................................ 36
1.2.3. Механизм действия адъювантов...................... 42
1.3. Принципы контроля иммуногенности противовирусных препаратов................................................... 45
1.4. Заключение по обзору литературы.......................... 50
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..................................... 52
2.1. Материалы и методы....................................... 52
2.1.1. Характеристика используемых материалов............ 52
2.1.2. Характеристика применяемых методов................ 54
2.2. Результаты исследований.................................. 64
2.2.1. Разработка метода обнаружения специфического ГА-
антигена в эмульсионных моновалентных вакцинах
3
против ССЯ-76.................................... 64
2.2.2. Разработка метода выявления ГА-антигена вируса ССЯ-76 в инактивированных поливалентных эмульсионных вакцинах................................... 73
2.2.3. Отработка методики определения количества гемагглютинина в сорбированных вакцинах
против ССЯ-76.................................... 75
2.2.4. Влияние количества ГА-антигена в составе инактивированных вакцин на их антигеную активность... 79
2.2.5. Оценка эффективности эмульсионных инактивированных вакцин против ССЯ-76 по количеству действующего начала в прививной дозе................................. 84
2.2.5.1. Определение протективного уровня поствакцинальных антител, обеспечивающих защиту цыплят от заражения вирусом ССЯ-76.... 85
2.2.5.2. Гистологические изменения в репродуктивных органах птиц привитых препаратами с различным содержанием ГА-антигена вируса ССЯ-76............... 88
2.2.6. Зависимость антигенной активности сорбированных вакцин от содержания Г А-антигена вируса ССЯ-76 96
2.2.7. Сравнительная оценка методов контроля биофабричных серий вакцин против ССЯ-76 по количеству ГА-антигена и
антительному ответу............................... 98
2.2.8. Адаптация вируса ССЯ-76 к культуре клеток эмбрионов птиц................................................... 103
3. ОБСУЖДЕНИЕ.................................................. 109
4. ВЫВОДЫ.................................................. 120
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ................................ 122
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ....................................... 123
7. ПРИЛОЖЕНИЯ.............................................. 142
13
штаммы, идентифицированные как вирус ССЯ-76 от клинически здоровых утят и взрослых уток (92,135,139,146,155,198, 205).
Этиологическая роль утиного вируса в возникновении заболевания была доказана многочисленными исследованиями. При экспериментальном заражении, независимо от метода введения возбудителя, у кур-несушек через 4-8 суток наблюдали снижение яйценоскости и появление депигментированных и декапьцинированных яиц (108,115,126,127,144,205).
По мнению многих ученых, искусственное инфицирование утиным аденовирусом куриных стад в целом ряде стран, произошло после применения вакцины против болезни Марека, изготовленной в Нидерландах на основе клеточных культур утиных эмбрионов, контаминированных вирусом ССЯ-76 (161).
1.1.2. Характеристика вируса ССЯ-76
В 1975 году все аденовирусы, выделенные от человека, млекопитающих и птиц, были объединены Международным комитетом по таксономии вирусов в семейство АОЕЫОУШЭЛЕ, в котором было определено два рода: Ау1ас1епо\чги8 и Маз1ас1епо\г1ги8 (22,69,71,142,195,201).
Выделенные вирусы были объединены в одну группу благодаря схожим фенотипическим свойствам, таким как размер и форма частиц, отсутствие липопротеидной оболочки.
Аденовирусы имеют форму икосаэдра (20 триангулярных поверхностей и 12 вершин) и строятся из капсида и сердцевины. Капсид вирионов состоит из 252 капсомеров, 240 из которых гексоны, окруженные шестью соседними капсомерами и 12-пентоны расположенные в вершинах икосаэдра и окруженные пятью припентонными гсксонами. От каждой из вершин инкосаэдра отходит отросток-фибер. Его длина варьирует у различных аденовирусов. Этот критерий используется при классификации вирусов.
Основными белками капсида являются белки гексон и пентон. Гексон является главным структурным компонентом вириона аденовирусов. Он образует поверхность икосаэдрических граней капсида и составляет примерно 50 % от массы вириона. Вирус ССЯ-76 по структурно-
14
функциональной организации и физико-химическим свойствам занимает промежуточное положение между аденовирусами млекопитающих и птиц.
По морфологическим и физико-химическим свойствам вирус ССЯ-76 во многом сходен с другими аденовирусами птиц. Его размер колеблется от 70 до 90 нм в диаметре, вирион представляет собой нуклеоид и внешний капсид.
Геном вируса ССЯ-76 представлен линейной молекулой ДНК, включающего 34 ООО пар нуклеотидов. Молекулярная масса вириона равняется 170-175 мегадальтон, константа седиментации 560, плавучая плотность в ірадиенте хлорида цезия составляет 1,32-1,35 г/см3 (149,150).
Строение вируса ССЯ-76 не совсем типично для аденовирусов птиц. По результатам электронной микроскопии вирионы его имеют один фибер, а не двойной, хотя на препаратах присутствуют группы из 6 гсксонов. Он имеет 132 структурных полипептида, 7 из которых соответствуют полипептидам характерным для куриного аденовируса типа 1 (71,89).
Гексон вируса ССЯ-76 практически не изучен. Результаты сранительного изучения белков вирионов ССЯ-76 и FAV-1 методом электрофореза в ДСН-ПААГ впервые были опубликованы Todd и McNulty (185). При анализе разрушенных очищенных препаратов вируса ССЯ-76 авторами были обнаружены 13 полос с молекулярной массой от 11 до 120 кДа верхняя из которых, имеющая молекулярную массу 120 кДа, соответствовала белку гексона.
Антигенная активность аденовирусов обусловлена наличием в структурах гексона двух антигенных детерминант: группоспецифической и
типоспецифической.
Пептон вируса ССЯ-76 так же полностью не изучен. Установлено, что отросток пентона состоит из трех областей, а именно: N-концевой области, ответственной за прикрепление фибра к основанию пентона, стержня и головки (С-концевая область). Г оловка содержит антигенную j-типоспецифическую детерминанту, которая идентична вирусному гемагглютинину (89,140).
- Київ+380960830922