Оглавление
1. ВВЕДЕНИЕ................................................3
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ........................................9
2.1. Вирус осповакцины...................................9
2.1.1. Строение вируса ................................9
2.1.2. Репликация вируса...............................10
2.1.3. Клиническое проявление инфекции.................11
2.1.4. Патогенность и вирулентность....................12
2.1.5. Возможные поствакцинальные осложнения...........19
2.1.6. Векторные системы на основе вируса осповакцины..21
2.1.7. Безопасность ВОВ и рекомбинантных вакцин........25
2.2. Вирус бычьего лейкоза..............................27
2.2.1. Классификация...................................27
2.2.2. Морфология и физико-химические свойства ВЕЛ.....28
2.2.3. Геном ВБЛ.......................................2Р
2.2.4. Структурные белки ВБЛ...........................34
2.2.5. Иммунитет и средства специфической профилактики....37
2.2.6. Проблемы разработки вакцины против ВБЛ..........41
2.2.7. Разработка рекомбинантных вакцин против ВБЛ.....44
2.3. Заключение.........................................48
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ...............................51
3.1. Материалы и методы.................................51
3.2. Результаты исследования............................55
3.2.1. Трансдукция клеточных культур рекомбинанными вирусами осповакцины................................55
3.2.2. Индукция антител против gp51 ВБЛ у кроликов, привитых различными рекомбинантами вируса осповакцины........59
3.2.3. Оценка нейровирулентной активности векторной системы на основе вируса осповакцины................62
3.2.4. Реактогенность рекомбинантного вируса осповакцины, экспрессирующего ет ген ВБЛ.........................65
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.................................73
5. ВЫВОДЫ.................................................84
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ......................................86
2
1. Введение
Лейкоз крупного рогатого скота (КРС) относится к числу опухолевых заболеваний, индуцируемых вирусной инфекцией. Возбудителем является вирус бычьего лейкоза (ВБЛ). Это РНК - содержащий вирус из семейства ЯейштсЬе, подсемейства Опсолчппае. Он входит в одну группу с возбудителем Т-клеточного лейкоза человека. ВБЛ, являясь экзогенным ретровирусом, имеет чрезвычайно высокое распространение среди животных, особенно в условиях индустриального животноводства с высокой концентрацией поголовья в хозяйствах. Инфи-цированность животных в некоторых стадах может превышать 50%. У части инфицированных животных развивается лимфоцигоз, у отдельн-рых - опухолевая форма болезни, приводящая их к гибели (Симонян Г.А., 1975; Кудрявцева Т.П., 1969).
Мероприятия по борьбе с бычьим лейкозом направлены на предупреждение ВБЛ - инфекции, как этиологической основы заболевания. При невысоком проценте инфицированных животных, достаточно диагностировать ВБЛ - инфекцию с помощью хорошо разработанных серологических методов, а затем удалить зараженных животных из стада. Однако в хозяйствах с высокой степенью инфицированности животных такой подход не может быть использован по экономиче-
трофореза в составе вирионов обнаружено более 100 полипептидов. А при использовании [3Н] фруктозы в вирионе выявили 14 гликополипептидов.
Геном поксвирусов представлен линейной двух цепочечной ДНК с ковалентно замкнутыми концами. ДНК ВОВ имеет размер 186-192 г.п.н. в зависимости от штамма вируса и кодирует более 200 полипептидов (Рязанкина О.И., Щулкунов С.Н., 1993; Dales
S., Polo В., 1981; Joklin W., 1966) В адсорбции на поверхности клеток участвуют белки 54К, 32К и 29К, а также гликопротеид 37К. Существенную роль в проникновении вируса в клетку могут играть белки 59К и 34К, а также белок внешней мембраны 14К. Белок 14К, экспонируясь на клеточной поверхности, вызывает также слияние клеток в поликариоциты. Этот белок высококонсервативен внутри группы ортопоксвирусов. Его изменение приводит к уменьшению как размера вирусных бляшек на культуре клеток, так и инфекционности вируса.
2.1.2. Репликация вируса
Культивирование вирусов оспы, методы титрации и очистки были достаточно изучены и отработаны в 60-е годы (Moss В., et al., 1971). Культивирование рекомбинантов ВОВ чаще всего проводят на культурах клеток почки зеленой мартышки Vero,
ю
CV-1 (Barrett N., et al., 1989), на которых через 72 часа отмечают характерное для вируса осповакцины цитопатогенное действие.
Репликация и сборка происходит в цитоплазме на “вирусных фабриках’’ (тельцах включения) тельцах Гварнери, а образующиеся вирионы выходят из клетки при помощи почкования. У поксвирусов имеется общий гругшо-специфический нук-лепротеиновый антиген, вирусы рода Orthopoxvirus синтезируют невирионный гемагглютинин. Благодаря крупным размерам по-ксвирусы легко выделить методом центрифугирования при низких скоростях, что позволило точно определить их химический состав (Dales S., 1981).
2.1.3. Клиническое проявление инфекции.
Вирус осповакцины имеет широкий круг хозяев. К нему
восприимчивы человек, обезьяны, крупный рогатый скот, буйволы, свиньи, овцы, козы, кролики, морские свинки, крысы, мыши и пр. (Fenner et al., 1957; Dalt, 1964; Moss et al., 1987; Flexneret al., 1987). При том, что BOB хорошо реплицируется при нокуляции широкому Kpyiy млекопитающих, естественная передача вируса у животных не описана (Mem. WHO, 1985). В большинстве случаев внутрикожное введение вируса ведет к образованию оспенного поражения на месте введения, выражающееся в появлении
п
- Київ+380960830922