ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр
ВВЕДЕНИЕ 4
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1. КЛАССИФИКАЦИЯ РОТАВИРУСОВ 6
2. ЭПИЗООТОЛОГИЯ РОТАВИРУСНОЛ ИНФЕКЦИИ 8
3. БИОЛОГИЯ РОТАВИРУСОВ 24
4. ПАТОГЕННОСТЬ И АНТИГЕННЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ
ГЛЕНДУ РОТАВИРУСАМИ 28
5. ИММУНИТЕТ ПРИ РОТАВИРУСНОЛ ИНФЕКЦИИ 36
6. ДИАГНОСТИКА РОТАВИРУСНОЛ ИНФЕКЦИИ 39
7. ПРИМЕНЕНИЕ ИШУНОФЛШРЕСЦЕНЦИИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ РОТАВИРУСНОЛ ИНФЕКЦИИ ТЕЛЯТ 45
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИИ 51
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 51
I. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ 51
1.1. Приготовление первично-трипсинизированной
культуры клеток почек эмбрионов коров /НЭК/ 51
1.2. Получение сублиний клеток почек эмбрионов коров /ПЭК/ и изучение изменений морфологии клеток в монослое под воздействием различных факторов 54
1.3. Отработка методики культивирования лабораторного штамма ротавируса £>А II в монослоях клеточных культур ПЭК и СПЭВ, выращенных на покровных стеклах 55
1.4. Обнаружение специфического ротавирусного антигена в клеточных культурах ПЭК и СПЭВ на покровных стеклах, инфицированных лабораторным штаммом ротавируса обезьян “эА II 57
- 2 -
1.5. Гипериммунизащя коз 58
1.6. Гипериммунизавдя морских свинок 58
1.7. Гипериммунизация кроликов 59
1.8. Прямой метод реакции иммунофлюоресценции 60
1.9. Непрямой метод реакции иммунофлюоресценции 60
1.10. Обнаружение ротавирусного антигена при помощи РИФ в материалах, отобранных от больных и павших с признаком диареи новорожденных телят 61
1.11. Приготовление мазков из фекалий в полевых условиях 63
1.12. Приготовление мазков из фекалий в лаборатории 63
1.13. Приготовление мазков со слизистой прямой кишки больных диареей телят 64
1.14. Обнаружение ротавируса в фекалиях больных диареей телят на культурах клеток ПЭК и СПЭВ в РИФ 64
1.15. Приготовление мазков-отпечатков из слизистой тонкого отдела кишечника павших от диареи новорожденных телят 65
1.16. Приготовление гистосрезов стенки тонкого отдела кишечника павших от диареи телят для исследования в РИФ 66
1.17. Выяснение возможности титрования ротавируса в суспензии клеток СПЭВ при помощи РИФ 67
1.18. Исследование возможности использования РИФ при титровании ротавируса и постановке реакции виру снейтрализации 68
1.18.1. Титрование в РИФ ротавируса &А II 68
1.18.2. Постановка реакции нейтрализации на клетках
• • ПЭК и СПЭВ по ЩІД и РИФ 69
- II -
кишечных болезнях бактериальной природы и формированием представлений об их различных этиологических факторах, были получены убедительные данные о существовании и значительном распространении небактериального гастроэнтерита, инфекционный характер которого не вызывал сомнений. Многочисленные неудачные попытки обнаружить при этих заболеваниях бактериальный этиологический агент способствовали созданию концепции об их вирусной природе и стимулировало проведение исследований, направленных на поиск вируса-возбудителя или других доказательств их вирусной природы /5/.
Первое сообщение о выделении фильтрующего агента, связанного С синдромом гастроэнтерита принадлежит light and Eodes /1943/, которым удалось воспроизвести болезнь у телят введением им свободных от бактерии фильтратов фекалий детей, заболевших во время вспышек в детских яслях в Балтиморе и Вашингтоне /СМ/. Фильтрующий агент, названный авторами вирус Baltimore , оказался способным пассироваться на телятах, вызывая у них при оральном введении тяжелую диарею я выделялся с фекалиями# Лдль~ нейшие исследования /light and Hodes , 1949/, в которых было исследовано 110 телят, позволили установить, что вирусные агенты, выделенные из материала четырех вспышек острого гаст^-роэнтерита, являются идентичными по результатам испытаний перекрестного иммунитета, а нейтрализующие антитела не обнаруживаются в сыворотке крови детей в начале болезни, но появляются в период выздоровления. Методом фильтрации размер вируса был определен в 40-80 нм. Pa6oTaidght и н#аез не привлекла большого внимания после публикации, однако получила неожиданное
12 -
завершение в 1975 году. Накопленные к атому времени доказательства ротавирусной этиологии острого небактериального гастроэнтерита побудили Kodes исследовать под электронным микроскопом сохранившуюся с 1943 года высушенную под вакуумом пробу фекалии теленка, у которого после скармливания ему материала от больного ребенка развивалась диарея. Исследования проведенные Hyatt и Kapikian способствовали Обнаружить В пробе вирусные частицы, сходные с ротавирусом человека по размерам и морфологии /35; 45; 67/.
Позже, после первой публикации о ротавирусной диареи телят, McNulty и сотр. /1976/ продолжили изучение ротавирусной диареи этих животных. У новорожденных телят до трехнедельного возраста эти авторы исследовали выделение ротавируса с фекалиями, содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови, учитывая заболеваемость диареей. .Ротавирусы были обнаружены у 9 из II обследованных телят. У трех телят, у которых обнаруживали вирус и уровень иммуноглобулинов был выше 30 мг/мл, диарея отсутствовала. У четырех телят период выделения вируса совпал с проявлением диареи, у двух телят в период заболевания диареей выделить вирус не удалось. Таким образом, авторы пришли к выводу, что поражение телят диареей находится в прямой зависимости от уровня материнских иммуноглобулинов, поступивших с молозивом.
В 1975 году началось интенсивное изучение роли инфекционных агентов при диарее животных вообще и телят в частности.
Mebus /1976/, изучая вирусный энтерит, выделили от больных диареей телят ротавирусы и коронавирусы. Впервые они ука-
- Київ+380960830922