Оглавление
Введение.............................................................................5
Г ЛАВА I. Обзор литературы..........................................................11
1.1. Этиология туберкулеза..........................................................11
1.1.1. Характеристика микобактерий туберкулеза.....................................11
1.1.2. Механизмы иммунной защиты от Mycobacteria tuberculesis.......................16
1.1.3. Основные проблемы неэффективности иммунитета при
туберкулезе........................................................................18
1.1.4.11рофилактика туберкулеза.....................................................21
1.1.5. Лечение туберкулеза..........................................................26
1.2. Роль цинка как эссенциального элемента........................................31
1.2.1. Биологическая функция цинка..................................................31
1.2.2. Физиологическая роль цинка...................................................43
1.2.3. Биохимическая роль цинка.....................................................49
1.2.4. Роль цинка в иммунном ответе.................................................52
1.2.5. Препараты, содержащие цинк...................................................53
ГЛАВА II. Материалы и методы исследования
2.1. Материалы исследования.........................................................58
2.1.1. Объекты исследования.........................................................58
2.1.2. Лабораторные животные........................................................58
2.1.3. Культура клеток..............................................................58
2.2. Методы исследования...........................................................59
2.2.1. Исследования биологической акгивности
с использованием клеточного биосенсора..............................................59
2
2.2.2. Элементный анализ..........................................................61
2.3. Определение размерных спектров сунранадмолекулярных
комплексов растворов лекарственных средств.................................62
2.4. Детекция М. tuberculosis.....................................................64
2.5. Определение активности естественных киллеров (ЕК)............................64
2.6. Статистическая обработка результатов измерений...............................65
ГЛАВА III. Результаты исследовании
3.1. Изучение биологической активности фармацевтической
композиции (ФК)............................................................66
3.1.1. Обоснование выбора соли Zn (II) и хелатирующего
агента (глицин) в качестве основных компонентов
фармацевтической композиции................................................66
3.1.2. Неаддитивные эффекты при комбинированном действии
сульфата цинка и глицина на клеточный биосенсор............................69
3.1.3. Влияние исследуемой ФК на активность естественных киллеров................78
3.2. Изучение лечебно-профилактического действия ФК при
инфицировании Mycobacterium tuberculosis в модельных
экспериментах с лабораторными животными....................................80
3.3. Изменения содержания микроэлементов в органах и
тканях инфицированных животных.............................................83
3.4. Разработка нового экспресс-метода стандартизации жидких
лекарственных средств на примере разрабатываемой ФК.......................91
3
играет важную роль в жизнедеятельности микобактерий, в том числе обеспечивает их устойчивость к неблагоприятным воздействиям [112, 118]. В клеточной стенке находятся видоспецифические антигены. Особенностью клеточной стенки микобактерий является наличие в ней большого количества миколисвых кислот, в большинстве случаев ковалентно соединенных с нижележащим арабиногалактаном, который в свою очередь ковалентно сочленен с пептидогликаном (65, 78]. Цепи миколиевых кислот
аранжированы перпендикулярно поверхности клетки, формируя внутренний листок асимметричной двуслойной структуры, наружный слой которой образован полярными липидами. Длина цепей увеличивает латеральные взаимодействия между углеводными цепями. Таким образом, цепи миколиевых кислот создают исключительно плотно упакованные ряды с очень ригидной внутренней структурой [92, 99, 163]. Кроме того, тысячи остатков миколиевых кислот связываются с единственной группой головных макромолекул арабиногалактана. Оба указанных фактора создают весьма эффективные препятствия для проникновения липофильных молекул, например лекарственных препаратов, внутрь и затрудняют диффузию подобных молекул через двуслойный барьер. Также, подобный высокоэффективный барьер проницаемости предотвращает поступление питательных веществ и удаление продуктов распада [112, 125].
Грамотрицатсльные бактерии решают данную проблему путем внедрения в наружную мембрану двуслойных поринов, представляющих собой протеины, образующие неспенифические заполненные жидкостью каналы, обеспечивающие диффузию небольших молекул через мембрану [132]. Примечательно, что протеины клеточной стенки, формирующие такие заполненные жидкостью каналы, были обнаружены и у микобактерий [158]. Такой порин, представляющий собой малый протеин, делал возможной нсспсцифическую диффузию небольших молекул при внедрении его в липосомы, состоящие из яичного фосфатидилхолина. Диаметр возникающих пор был
12
равен примерно 2,2 нм. Специфическая активность порина микобактерий по меньшей мере в 20 раз ниже, чем у порина E. Coli. Столь невысокая активность, вероятно, обусловлена реконституцией липидов, которые могут отсутствовать в клеточной стенке микобактерий [72, 99J. Следует подчеркнуть, что низкая скорость проникновения через пориновый путь потеряла бы свое физиологическое значение без особых барьерных свойств всего непрерывного поверхностного слоя [67, 141]. Эго именно так, поскольку даже в известной степени гидрофильные компоненты способны растворяться в жидкости внутренней среды, если липиды обнаружат высокую текучесть. Действительно, диффузия моноанионных цефалоспоринов через липидный слой клеточной стенки у микобактерий происходит в 10 раз быстрее, если сами липиды клеточной стенки не сформировали описанную выше структуру 1132, 1581.
Вакцины, приготовленные из клеточных стенок туберкулезных микобактерий, имеют разные вирулентность и иммуногсниость. Наиболее выраженный иммунитет вызывают вакцины из клеточных стенок высоковирулентных микобактерий. Клеточные стенки вызывают в организме здоровых животных развитие повышенной чувствительности замедленного типа (11ЧЗТ), антителообразование [125, 136]. Однако их сильные сенсибилизирующие свойства и наличие в них токсического корд-фактора значительно осложняют гипериммунизацию этой фракцией микобактерий туберкулеза. Задача заключается в выделении из фракций клеточных стенок компонентов, обладающих высокой протективной активностью [118, 126].
Цитоплазматическая мембрана микобактерий туберкулеза путем инвагинации в цитоплазму формирует внутрицитоплазматическую мембранную систему, или мезосому. Мсзосомы полифункциональны. С ними связана локализация многих ферментных систем, они участвуют в синтезе материала клеточной стеки, выполняют роль посредника между ядром и цитоплазмой. Отмечено слабое развитие или отсутствие
13
- Київ+380960830922