СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АБТС - 2,2-азино-дн-(-3-этилбензтиазолинсульфонат)
а. о. - аминокислотный остаток
ВНИИЗЖ-Всероссийский научно-исследовательский институт защиты
ВТ - врождённый тремор
гтц - гуанидинизотиоцианат
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ДСН - додецилсульфат натрия
дснп - дерматит и синдром нефропатии
ИПМА-иммунопероксидазный монослойный анализ
ИПТГ - изопропилтио-Р-О-галактопиранозид
ИФА - иммуноферментный анализ
КК - культура клеток
мПЦР - мультиплексная полимеразная цепная реакция
МФА - метод флюоресцирующих антител
НРИФ - непрямая реакция иммунофлюоресценции
и.о. - нуклеотидное основание
ОП - оптическая плотность
ОРС - открытая рамка считывания
ПААГ - полиакриламидный гель
ГГВНС - парвовирусная инфекция свиней
п.п. - пар нуклеотидов
ПНП - пролиферативная некротизирующая пневмония
ПНП - позитивно-негативный порог
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНИФ - реакция непрямой иммунофлюоресценции
РРСС-репродуктивно-респираторный синдром свиней
СМИ О - синдром мультисистемного истощения отьёмышей
ТБЕ - трис-боратный буфер
ФБР - фосфатно-буферный раствор
ЦВС-1 (ЦВС-2)-цирковирус свиней типа 1 (типа 2)
ЦПД - цитопатическое действие
ЭДТА - этилендиаминтстраацетоуксусная кислота
сИЧТР - дезоксирибонуклеозидтрифосфат
з
ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр.
ВВЕДЕНИЕ.......................................................... 6
І.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................ 10
1.1. Классификация цирковирусов.................................. 10
1.2. Структурно-функциональная организация цирковирусов свиней 10
1.3. Патогенность цирковирусов свиней............................ 13
1.3.1.Патогенность ЦВС-1........................................ 13
1.3.2. Патогенность ЦВС-2....................................... 14
1.З.2.1. Синдром мультнсистсмного истощения отьёмышен 14
1.3.2.1.1. Эпизоотология...................................... 14
1.3.2.1.2. Клинические признаки............................... 16
1.3.2.1.3. Патологоанатомические изменения.................... 17
1.3.2.1.4. Патогенез СМИО..................................... 17
1.3.2.1.5. Экспериментальная инфекция СМИО.................... 25
1.3.2.2 Дерматит и синдром нефропатии поросят................. 27
1.3.2.3 Инфекционные врождённые треморы....................... 28
1.3.2.4 Пролиферативная некротизирующая пневмония............. 29
1.3.2.5 Комплекс респираторной патологии...................... 29
1.3.2.6 Репродуктивные нарушения и перинатальный миокардит 30
1.4. Распространение цирковирусов свиней......................... 31
1.5. Диагностика цирковирусной инфекции свиней................... 33
1.5.1. Обнаружение вируса или вирусного антигена................ 33
1.5.2. Обнаружение антител к ЦВС-1 и ЦВС-2...................... 37
1.5.3. Дифференциальный диагноз................................. 39
1.6. Меры борьбы с цирковируспой инфекцией свиней................ 40
1.7. Заключение по обзору литературы............................. 41
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ....................................... 43
2.1. Материалы................................................... 43
2.1.1. Патологический материал.................................. 43
2.1.2. Клеточные культуры....................................... 43
12
500 _l____
1000
1500
____1___
цвс
CCACOTCATCCTATAAAAGTGAAAG ICGGCAGL‘GGC'AG<1 ACC IK-'GGCAGf G — ICACJIG—AAAATGCCAAGCAAGAAAAG
ЦВС-1
о
G С
A T
ATACGTC ATAGC-TG A A A ACG AAA<j I^GGCAGtGGCAGt ACC ICGGCAG(TACCTCAGCAGCAACATGCCCAGCAAGAAGAA
ЦВС-2
Рис. 2. Линейная карта кольцевых геномов ЦВС-1 и ЦВС-2.
Сайт репликации расположен между cap и гер генами. Для обоих вирусов показана структура петлевого элемента и примыкающих повторов из 6-ти и 5-ти и.о. Различия в последовательностях сайта репликации у ЦВС-1 и ЦВС-2 подчёркнуты. Показаны гер и гер’ транскрипты и место сплайсинга (132).
Сайт репликации ЦВС-1 включает 111 и.о. (с 728 по 828) (134). Он расположен на межгенном участке генома и содержит петлевую структуру с последовательностью 5’-TAGTATTAC в её верхушечной части. Подобный мотив был обнаружен не только у цирковирусов, нановирусов и геминивирусов, но и в нескольких плазмидных репликонах, реплицирующихся по механизму катящегося кольца. К петлевой структуре примыкают четыре гексамера 5’-CGGCAG, которые являются сайтами связывания репликазы (192).
С ОРС1 ЦВС-1 синтезируются два РНК-транскршгга: одна изоформа представляет полноразмерный Rep-ген и кодирует Rep-белок из 312 а.о.,
вторая изоформа образуется в результате сплайсинга первичного транскрипта и кодирует Rep’-белок из 168 а.о. Оба белка необходимы для репликации ДНК вируса (132). Только Rep или только Rep’ не могут инициировать репликацию (133).
Гомология ОРС1 между ЦВС-1 и ЦВС-2 составляет 83% на нуклеотидном и 86% на аминокислотном уровне. Rep-белок консервативен для всех цирковирусов. Он также гомологичен репликативным белкам цирковирусов растений и геминивирусов. Результаты филогенетического анализа свидетельствуют о том, что ген, кодирующий репликазу цирковирусов, мог возникнуть в результате рекомбинации между генами нановирусов и пикорна-подобных вирусов (88). Высказывалось предположение об участии гена хеликазы прокариотического происхождения в подобном рекомбинационном событии (109).
ОРС2 (cap-ген) кодирует основной структурный белок цирковирусов. У ЦВС-1 капсидный белок состоит из 234 а.о. N-конец капсидного белка содержит много аргининовых остатков, придающих сильный положительный заряд этому участку молекулы.
Cap-белок является многофункциональным протеином, он играет ключевую роль в вирулентности цирковирусов (137). Предполагают, что структура Сар-протеина соответствует p-цилиндрической структуре, обычной для всех одноцепочечных ДНК вирусов, p-спирали соединены сильно закрученными структурами, в которых локализованы иммуногенные домены. Участок 137-177 а.о. Сар-белка является ключевым регионом, участвующим во взаимодействии вирус-хозяин или сборке вириона, то есть в связывании с рецептором и взаимодействии между мономерами капсида (138).
1.3. Патогенность цирковирусов свиней
1.3.1. Патогенность ЦВС-1
Заражение новорождённых поросят ЦВС-1 не сопровождается развитием каких-либо клинических признаков и патологических изменений,
- Київ+380960830922