2
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ антиген
АГГ антирабический гамма-глобулин
АТ антитела
АнМКА антинуклеокапсидные моноклональные антитела БСА бычий сывороточный альбумин
ВНИВИ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт ВБ вирус бешенства
ВБА вирус болезни Ауески
ГП гликопротеиновый
ДСН додецилсульфат натрия
ИФА иммуноферментный анализ
КББ карбонатно-бикарбонатный буфер
КГ конъюгат
Ксп коэффициент специфичности
кД килодальтон
КРС крупный рогатый скот
КС комплементсвязывающий
МКА моноклональные антитела
MPC мелкий рогатый скот
МФА метод флуоресцирующих антител
НАФ неполный адъювант Фрейнда
НБ нейробластома
NGUK-1 перевиваемая линия клеток невриномы Гассерова узла крысы-1 НИФА непрямой иммуноферментный анализ НК нуклеокапсидный
НМФА непрямой метод флуоресцирующих антител
3
НТД нормативно-технические документы
ОФД орто-фенилендиамин
ПААГ полиакриламидный гель
ПАФ полный адъювант Фрейнда
ПЭГ полиэтиленгликоль
РДСК реакция длительного связывания комплемента
РДП реакция диффузионной преципитации
РИА радиоиммунный анализ
PH реакция нейтрализации
РТ Республика Татарстан
УЦФ ультрацентрифугирование
ФАГ флуоресцирующий антирабический глобулин
ФБР фосфатно-буферный раствор
ФБР-Т фосфатно-буферный раствор с твином
ФГУ ФЦТРБ Федеральное государственное учреждение «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных»
ФСК фетальная сыворотка крупного рогатого скота
ФЦБ фосфатно-цитратный буфер
ЦПД цитопатическое действие
ЭДТА двунатриевая соль этилендиаминатетрауксусной кислоты
IgG (А, М) иммуноглобулин класса G (А, М)
CVS challenge virus standard (стандартный вирусный штамм)
12
одноцепочная негативно-спиральная РНК длиной около 12 тысяч пар оснований и молекулярной массой 3500-4600 кД, кодирующая пять основных белков: в, И, N8, М и Ь.
Вирионы содержат также РНК-зависимую РНК-полимеразу. Вирус имеет плавучую плотность в СзС1-1,32 г/см3. Вирион вируса бешенства содержит два основных антигена, один из которых представляет собой гликопротеин вирусной оболочки, второй - внутренний нуклеопротеид вириона (Дудников
С.А. и соавт., 1997; Наумкина М.А. и соавт., 2000).
Полипептид с самой высокой относительной молекулярной массой (65-70 кД, 1800 молекул на вирион) оказался гликопротеином (О-белок), образующим шипы внешней оболочки. Он ответственен за продукцию вирус-нейтрализующих антител, антигемагллютининов и за формирование иммунитета к заражению вирусом бешенства. В связи с этим вируснейтрализую-щие антитела, направленные против гликопротеина (О-белка) вируса бешенства, являются важным компонентом иммунных реакций при бешенстве (Дудников С.А. и соавт., 1997; Б1е&зс1юМ В. & а1., 1986, 1996; КМ В. е1 а1., 1995). В то же время гликопротеин ВБ не выявлялся в мозге мышей, инфицированных уличным ВБ, но обнаруживался у мышей, зараженных штаммом СУБ (Груздев К.Н., Недосеков В.В., 2001; Tsiang Н., 1983). Гликопротеин содержит три домена: N - концевой участок белка (эктодомен) расположен до позиции 439; трансмембранный домен локализован между 440 и 461 аминокислотами; С - концевой участок (эндодомен) расположен с 462 по 505 аминокислот. Экто- и эндодомены являются растворимыми фракциями гликопротеина. Основные функциональные регионы, включая нейтрализуемые эпитопы локализованы на эктодомене. Трансмембранный домен ацетилиро-ван и выполняет функцию внутриклеточного транспорта гликопротеина и формирования функциональной целостности белка, так как растворимые домены гликопротеина не способны индуцировать протективный иммунитет. Эктодомен играет ведущую роль в патогенезе болезни: в прикреплении ви-
13
рионов к мембране клетки, как инициирующий шаг вирусной инфекции, и связывании с нейтрализующими антителами. По данным В. Dietzschold (1983), аргинин или лизин в позиции 333 являются ответственными за патогенность ВБ и замена аргинина в позиции 333 на глютамин или изолейцин приводит к снижению патогенности в связи с отсутствием распознавания эпитопов оболочки вируса рецепторами клеток - хозяина (Morimoto К. et al., 1992; Gaudin Y., 1993). Установлено, что белок-G может иметь, по крайней мере, три различных состояния: нативное (N), обнаруженное на поверхности вириона при pH выше 7,0; активизированное (А) гидрофобное состояние, которое позволяет взаимодействовать с клеточной мембраной как первый шаг процесса слияния и бездействующее (www.cdc.gov/ncidod/dvrd/rabies).
Нуклеопротеин (N-белок) (относит, молекул, масса 57 кД, 1750 молекул на вирион) является группоспецифическим антигеном для всех лиссавиру-сов, выделенных на различных континентах. Он обнаруживается методом флуоресцирующих антител (МФА) - в реакциях связывания комплемента (РСК) и диффузионной преципитации (РДП), играет важную роль в формировании клеточного иммунитета. Нуклеопротеин вызывает образование в организме комплементсвязывающих и преципитирующих антител. Результаты современных исследований позволяют предполагать, что N-белок является основным антигеном, обладающим способностью стимулировать перекрестные реакции между вирусами бешенства и различными родственными ему вирусами (Груздев К.Н., Недосеков В.В., 2001; Ertl С., 1989, 1991; Frederic I. et al., 1998; Yang J. et al., 1998).
M. Tollis (1991) показал, что не только гликопротеин, но и нуклеопроте-ид ВБ может обеспечивать формирование протсктивного ответа. Более того, N-белок является перспективным кандидатом для расширения спектра вакцин, особенно в отношении разных серотипов ВБ.
Селимовым М.А. (1978) предложена следующая классификация вариантов вируса уличного бешенства, основанная на эволюционно-экологическом
- Київ+380960830922