2
ОГЛАВЛЕНИЕ
стр.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ................................................ 5
1. ВВЕДЕНИЕ...................................................... 8
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................. 15
2.1. Фенотипические свойства возбудителя сибирской язвы 15
2.1.1. Морфологические свойства........................... 15
2.1.2. Культуральные свойства............................. 16
2.1.3 .Биохимические свойства............................. 17
2.1.4. Чувствительность к антибиотикам и бактериофагам. 19
2.1.5. Антигенная структура............................... 22
2.2. Факторы патогенности.................................... 24
2.3. Генетический аппарат возбудителя........................ 29
2.4. Изменчивость биоморфологических и патогенных свойств В. аМкгаыв................................................... 32
2.5. Некоторые аспекты внутривидового типирования возбудителя сибирской язвы............................................ 36
2.5.1. Фенотипическая систематика В. аЫкгаЫв.............. 37
2.5.2. Геносистематика В. амкгаыв......................... 41
2.6. Заключение по обзору литературы......................... 49
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..................................... 51
3.1. Материалы............................................... 51
3.1.1. Штаммы микроорганизмов............................. 51
3.1.2. Питательные среды.................................. 51
3.1.3. Ферменты........................................... 51
3.1.4. Реактивы........................................... 51
3.1.5. Растворы........................................... 52
3.1.6. Лабораторное оборудование.......................... 52
3.1.7. Животные........................................... 52
3.2. Методы.................................................. 53
з
3.2.1. Получение спорового материала........................ 53
3.2.2. Определение концентрации жизнеспособных спор 53
3.2.3. Изучение культурально-морфологических свойств 53
3.2.4. Получение фильтратов бульонных культур............... 53
3.2.5. Определение гемолитической активности................ 54
3.2.6. Определение уровня протеолитической активности. ... 54
3.2.7 .Определение токсино- и капсулообразующей
способности штаммов В. аМкгаск.............................. 54
3.2.8. Изучение антигенной специфичности методом РДП. .. 55
3.2.9. Определение пигментсорбирующей способности штаммов.................................................. 55
3.2.10. Определение лецитиназной активности................. 55
3.2.11. Определение фосфатазной активности.................. 55
3.2.12. Определение вирулентности изолятов.................. 55
3.2.13. Выделение бактериальной ДНК......................... 56
3.2.14. Постановка ПЦР...................................... 57
3.2.15. Статистическая обработка результатов................ 57
3.3. Результаты исследований................................... 58
3.3.1 .Общая характеристика и биологические свойства
штаммов..................................................... 58
3.3.2. Изучение фенотипических свойств...................... 63
3.3.2.1. Гемолитическая активность.......................... 63
3.3.2.1.1. Разработка способа определения гемолитической активности штаммов В. аткгасіз........................... 65
3.3.2.1.2. Изучение ингибирующего действия сывороточных препаратов на гемолизины В. апіїгасіз.................... 75
3.3.2.2. Лецитиназная активность............................ 77
3.3.23.Протеолитическая и пигментсинтезирующая
активности штаммов В. агиНгасІБ............................. 80
З.З.2.4. Фосфатазная и пигментеорбирующая активность... 83
13
участников СНГ «Современные технологии в диагностике особо опасных инфекционных болезней» (Саратов, 2003).
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ, в т.ч. 2 статьи в центральных научных журналах.
Личный вклад
Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором самостоятельно. В выполнении работы по разделам 3.3.2.6.,
ч
3.3.3., 3.3.3.1., 3.3.3.2. оказывали практическую и консультативную помощь сотрудники ГНУ ВНИИВВиМ: Цыбанов С.Ж., Стрижаков A.A., Стрижакова
О.М., Новиков Б.В., Дмитренко Н.В., Пантюшенко М.С.
Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:
1. Штаммы и изоляты сибиреязвенного микроба обладают гемолитической активностью и экспрессируют экзотоксины различной природы, вызывающие лизис эритроцитов барана по а- или ß-типу.
2. Питательная среда для определения гемолитической активности и ее типа у В. anthracis.
3. Комплекс таких фенотипических маркеров, коррелирующих со степенью вирулентности, как капсуло- и токсинообразование in vitro, гемолитическая, протеолитическая, пигментсорбирующая активности, тип гемолиза и способность синтезировать протокатекуевую кислоту, позволяет выявлять различия между штаммами.
4. С использованием трех праймеров методом RAPD-fmgerprinting выявляется геномный полиморфизм хромосомной ДНК штаммов возбудителя сибирской язвы, выделенных в различных регионах РФ.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов,
14
выводы и приложения. Диссертация иллюстрирована 13 рисунками и 16 таблицами. Список литературы содержит 222 источников, в т.ч. 99 зарубежных авторов.
Исследования по диссертационной работе выполнены в 2001-2003 г.г. в лабораториях “Экспериментальной микробиологии” и “Биофизики” ГНУ ВНИИВВиМ в соответствии с утвержденными плановыми заданиями НИР Российской академии сельскохозяйственных наук по теме 01.01.02 «Провести сравнительный анализ генома референс-штаммов и полевых изолятов различных возбудителей особо опасных болезней животных и разработать методы оценки изменений генома, а также дифференциации различных изолятов с использованием моноклональных антител» и 01.02.03 «Поддержание и развитие коллекции штаммов микроорганизмов ВНИИВВиМ, в том числе возбудителей экзотических и особо опасных болезней животных, с целью создания на их основе высокоэффективных диагностических и вакцинных препаратов».
В выполнении отдельных разделов работы принимали участие: заведующий лабораторией «Биофизики» доктор биологических наук Цыбанов
С.Ж. (п. 3.3.4.2), старший научный сотрудник лаборатории «Биофизики», кандидат биологических наук Пантюшенко М.С. (п. 3.3.4.1), старший научный сотрудник лаборатории «Диагностики» Стрижакова О.М. (п. 3.3.2.6),
заведующий лабораторией «Эпизоотологии» Стрижаков A.A. (п. 3.3.2.6), старший научный сотрудник лаборатории «Эпизоотологии», кандидат биологических наук Дмитренко Н.В. (п. 3.3.3), заведующий лабораторией «Прионных болезней» Новиков Б.В. (п. 3.3.3), которым автор выражает искреннюю признательность.
- Київ+380960830922