2
СОДЕРЖАНИЕ
стр.
4
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
1.1. Генетически-модифицированиые источники питания 9
1.2. Создание генетически-модифицированных животных 11
1.3. Методы определения генетически-модифицированных 17
компонентов в продуктах питания
1.4. Методы оценки безопасности продукции, полученной из 22
генетически-модифицированных источников
1.5. Безопасность и качество мясного сырья, включая трансгенное 25
мясное сырьё
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 30
2.1. Цель и задачи исследования 30
2.2. Материалы и методы исследования 32-
2.3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 40
2.3.1. Выявление чужеродной ДНК в трансгенной свинине, вареных 40
колбасах и консервах, содержащих свинину трансгенного происхождения и мышечной ткани перепелов Выделение ДНК 40
Определение концентрации ДНК и степени ее очистки 41
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 42
2.3.2. Исследование токсичности трансгенной свинины и 46 изготовленных из неё вареной колбасы и консервов с использованием тест-организма Тесаку тепа руп/отт
2.3.3. Определение относительной биологической ценности (ОБЦ) 48 трансгенной свинины, вареной колбасы и консервов, изготовленных из трансгенной свинины, в опытах на инфузориях.
2.3.4.
2.3.4.1.
2.3.4.2.
2.3.4.3.
2.3.4.4.
2.3.5.
2.3.6.
2.3.7.
2.3.8.
3
Токсикологическая оценка трансгенной свинины и продуктов 50 её переработки
Токсикологическая оценка трансгенной свинины на перепелах 50 Токсикологическая оценка трансгенной свинины 56
Токсикологическая оценка вареных колбас 57
Токсикологическая оценка консервов 59
Ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя трансгенных 61 свиней
Физико-химические исследования мышечной ткани свиней 65 Микробиологическая оценка мяса и мясопродуктов 67 трансгенного происхождения
Результаты гистологических исследований продуктов убоя 70 трансгенных свиней
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ 74
ВЫВОДЫ 82
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 85
ПРИЛОЖЕНИЯ 105
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Геиетически-модифицированные источники
9
Современное развитие животноводства немыслимо без использования последних достижений молекулярной биологии и молекулярной генетики, благодаря которым получили развитие новые направления биотехнологии -генная, клеточная инженерия и маркер-зависимая селекция.
Работы по трансгенезу в области животноводства можно подразделить на несколько направлений, наиболее ранним из которых явилось получение и исследование трансгенных особей с генами, связанными с экспрессией регуляторных белков (соматотропин, соматостатин и другие). Хотя первые трансгенные сельскохозяйственные животные, экспрессирующие такие белки, были получены почти 20 лет назад, влияние интеграции чужеродных генов на биохимические, физиологические и морфологические признаки, а также на уровень и направленность коррелятивных связей между этими признаками у генетически модифицированных индивидуумов изучены не достаточно полно (Зиновьева H.A., Эрнст Л.К.,2004).
Наиболее развитым на сегодня направлением биоинженерии является получение продуцентов биологически активных веществ для медицины и пищевой промышленности. Первые успехи в этом направлении были достигнуты в области микробиологии. Так, инсулин человека в производственных масштабах в настоящее время получают с помощью трансгенных микроорганизмов. Учитывая то, что получение трансгенпых микроорганизмов не вызывает трудностей, появилась надежда, что с использованием микроорганизмов можно производить все необходимые биологически активные вещества. Последующими экспериментами было продемонстрировано, что многие биологически активные вещества, необходимые для человека, могут продуцироваться только многоклеточными организмами, в частности позвоночными, и, что особенно важно, млекопитающими (Геогриев Г.П., 1989; Land R.B., Wimut I., 1987).
10
Возникло новое направление, связанное с получением трансгенных животных, являющихся продуцентами высококачественных биологически активных веществ. Особенно эффективным оказалось направление, использующее трансгенных сельскохозяйственных животных. Это связано, прежде всего, с высокой белковосинтезирующей функцией молочных желез домашних животных, особенно крупного рогатого скота. Важнейшим преимуществом этого направления является достаточно разработанная технология производства молока, позволяющая получать до 7000-10000 кг молока от коровы в год (Зиновьева H.A., Эрнст JT.K.,2004).
Другим важным фактором является возможность регулирования производства в зависимости от спроса простым изменением численности животных, что невозможно при традиционном промышленном производстве, например, микробиологическом. (Эрнст J1.К., 1995).
В 1988 году впервые были получены трансгенные овцы, производящие с молоком фактор свертывания крови, лечебное средство необходимое для людей, больных гемофилией. В последующий период в мире было создано более 20 типов трансгенных коров, коз, свиней, овец и кроликов (Эрнст Л.К., 1999).
Так как получение трансгенных сельскохозяйственных животных традиционными методами сопряжено с большими затратами, поиск альтернативных подходов трансгенеза приобретает большое значение. В последние годы возникло новое направление трансгенеза - соматический перенос генов. Сегодня уже доказано, что с использованием ретровирусных векторов можно производить генетическую трансформацию отдельных органов и тканей, получать стенотипических трансгенных животных. Отмечен определенный уровень рекомбинантного белка в молоке подопытных животных. В настоящее время эти исследования продолжаются.
Еще одним значимым для селекции направлением является получение трансгенных животных, генетически устойчивых к инфекционным
- Київ+380960830922