СОДЕРЖАНИЕ
стр.
ВВЕДЕНИЕ.................................................... 4
1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.......................................... 8
1.1. Характеристика иерсиний и их распространение в
объектах ветеринарно-санитарного контроля.................... 8
1.2. Методы индикации и идентификации иерсиний.................. 15
1.2.1. Бактериологический метод индикации У. еМегосоПпса......... 16
1.2.2. Иммунологические методы.................................... 18
1.2.3. Методы ДНК-диагностики .................................... 22
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ................................... 35
2.1. Материалы исследований..................................... 35
2.2. Методы исследований........................................ 35
2.2.1. Выделение хромосомных ДНК бактерий......................... 35
2.2.2. Выделение плазмидной ДНК.................................. 37
2.2.3. Включениетритиевой метки в ДНК методом ник-трансляции ... 38
2.2.4. Включение биотиновой метки в ДНК методом ник-трансляции....39
2.2.5. Получение меченых зондов с помощью
полимеразной цепной реакции..................................40
2.2.6. Гибридизация ДНК с тритиевой меткой....................... 41
2.2.7. ДНК-гибридизация с использованием тест-набора
с ДНК-зондами, меченными биотином........................... 42
2.2.8. Методика гибридизации колоний............................. 47
2.2.9. Методика полимеразной цепной реакции.......................48
2.2.10. Амплификация ДНК методом рассеянной затравки...............49
2.2.11. Статистическая обрабока результатов........................50
2.3. Результаты исследований....................................50
3
2.3.1. Разработка тест-системы индикации У. еШегосойПса
на основе ПЦР.............................................. 50
2.3.2. Разработка методов и тест-систем индикации У. етегосоПбса с
использованием генных зондов............................... 54
2.3.3. Разработка методик индикации патогенных штаммов
^ У.еШегосоПиса с использованием плазмидной ДНК...............65
2.3.4. Оценка методов и тест-систем ДНК-диагностики для выявления
У.еЫегосоПЕса при мониторинге кормов и мясной продукции ... 72
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ......................................78
ВЫВОДЫ......................................................92
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ....................................94
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...........................................95
ПРИЛОЖЕНИЕ............................................ 111
*
*
вспышках, вызываемых Y. enterocolitica сероваров 07,8; 06,30 (Kapperud
G., 1991).
Иерсинии выделены от грызунов (Каланина A.A. и др., 1989; Ющенко Г.В.,1989; Ахмедов P.A., 1991;), свиней (Кирьянов Е.А. и др.., 1989; Стефанов И., 1989, 1990; Fukushima 1. et al; Kvvaga Jacob K.P. ct al., 1991; Jakubczak A. et al., 1992), коров (Кирьянов Е.А. и др., 1989; Стефанов И., 1989; Тебекин А.Б. и др., 1991; Jakubczak A. et al., 1993), диких животных (Шумилов К.В. и др., 1998 ; Jakubczak A. et al., 1992), и птицы (Куликовский A.B. и др., 1993; Шумилов К.В. и др., 1998; Kaneuchi Choji et el., 1989).
В большинстве случаев наиболее опасным источником инфекции для человека считают свиней (Куликовский A.B., Джентемирова K.M., 1993)
Иерсиниоз отмечен у уток, чаек, ласточек. Их инфицированность составила 45,6; 15,2 и 17,2% соответственно (Kaneuchi Choji et al., 1989).
Благоприятными условиями для распространения возбудителей иерсиниоза являются централизованные заготовки, длительная транспортировка и хранение кормов и пищевых продуктов, а также несовершенство встиринарно-санитарного контроля. У животных разных видов и возрастных групп иерсиниоз проявляется по разному. Особенно подвержен заболеванию молодняк, у которого иереинеоз протекает более остро, нередко в септической форме (Шумилова К.В. и др., 1998).
Среди людей и животных обнаружены «здоровые
бактерионосители». При обследовании 1285 здоровых людей, поступающих на работу на пищевые объекты у 10,5 % были обнаружены иерсинии различных сероваров, в том числе 03; 05 и 09, часто являющихся причиной заболевания кишечным иерсиниозом (Багрянцев В. И., Кузнецов В.Г., 1989; Старыгина Г.А. и др., 1989; Малькова Г.И. и др., 1991;ЦеневаГ.Я., 1992).
Инфицированность овощей У.еЩегосо1Шса составляет в среднем от 9% (Старыгина Г.А. и др., 1989) до 15,5% (Хачатрян Т.С., 1988).
Помимо фруктов и овощей одним из главных факторов передачи иерсиниоза является молоко (Ющук Н.Д., Кареткина Г.Н., 1987). По многочесленным данным иерсинии обнаруживаются в пастеризованном молоке (Славчев Г., 1986; Ошейкр Л.М., 1997; УеБнп ОгЬаз Ъ с1 а]., 1993). По данным Кузнецовой В.Г и Багрянцевой В.Н. (1992) в 35,8% проб пастеризованного молока, поступившего в продажу, имелись У. еЩегосоПпса.
Таким образом, молочные продукты, которые человек ежедневно потребляет в качестве продуктов питания повседневного спроса, могут содержать в своем составе У. етегосоНбса. По данным американских исследователей причиной массового иерсиниоза в Нью-Йорке стало инфицированное шоколадное молоко, из которого была выделена У. еМегосоЙПса серовара 08.
При изготовлении масла в готовый продукт переходит около 15% микроорганизмов от общего количества иерсиний, содержащихся в исходном сырье. Иерсинии очень хорошо приспосабливаются к минусовым температурам. Так, в масле динамика существования иерсиний напрямую зависит от температурного режима. Чем ниже температура, а в масле она может колебаться от -17°С до -20°С, тем дольше живут иерсинии. При такой температуре жизнь иерсиний длится до 3 месяцев. Но стоит только довести температуру хранения до 0°С - 6°С, то сразу происходит процесс размножения иерсиний, при этом и количественное соотношение их будет больше в несколько раз (Славчев Г., 1989).
Мясо может быть контаминировано в процессе убоя и
разделки больных животных или бактерионосителей через поверхности оборудования и инструменты для убоя и разделки ( БикивЫта 1озЫ е! а!.,
- Київ+380960830922