Р А З Д Е Л 2
ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Наблюдения проведены в период 1997-2000 гг. на кафедре факультетской педиатрии (заведующий - проф. Ю.В. Одинец) Харьковского государственного медицинского университета на базе областного детского гематологического отделения городской детской клинической больницы N 16 г. Харькова (гл. врач - Т.В. Харченко), а также ЦНИЛ (заведующий - д.м.н. В.А. Коробчанский) Харьковского государственного медицинского университета.
Под нашим наблюдением находилось 77 детей в возрасте от 1 до 14 лет, из них 67 детей больных геморрагическим васкулитом и 10 здоровых детей. Последняя группа служила контролем.
Диагноз заболевания устанавливали на основании общепринятых клинико-лабораторных данных, а формулировали его в соответствии с критериями принятой в клинике рабочей классификации геморрагического васкулита, основные положения которой представлены в работе А.А. Ильина [20].
В соответствие с классификацией выделяли простую и смешанную формы заболевания; синдромы - кожный, суставной, абдоминальный, почечный; течение - острое (до 1.5-2 мес), подострое (от 2 до 6 мес.) и хроническое рецидивирирующее (свыше 6 мес.).
По тяжести течения заболевания выделяли легкое, средней тяжести, тяжелое, что соответствовало I, II, III степеням активности ГВ.
Критериями диагностики служили состояние больного, степень интоксикации, выраженность кожного синдрома с наличием или отсутствием некрозов, буллезных изменений, проявлений эритемы, крапивницы, отеков Квинке и др., суставного, абдоминального почечного синдромов или других органных либо системных поражений, изменения клинико-лабораторных, биохимических, иммунологических и инструментальных показателей.
2.1 Методы исследования
Основной метод нашего исследования - анализ клинико-лабораторных наблюдений.
Все дети, находившиеся под нашим наблюдением, тщательно клинически обследовались. Особое внимание обращали на анализ особенностей жалоб, общее состояние больного, температуру, характер изменений внутренних органов.
По показаниям детей консультировали отоларинголог, невропатолог, нефролог и другие специалисты, проводили рентгенологическое, ультразвуковое, электрокардиографическое исследования. Проводили анализы крови, мочи, кала на яйца глистов и простейшие и патогенную микрофлору.
Клинические исследования крови и мочи проводили по общепринятым методам В.Е. Предтеченского [35]; фракционирование белков крови - методом горизонтального электрофореза; уровни сиаловых кислот, серомукоидов - унифицированным методом В.В.Меньшикова [28].
Содержание электролитов (K,Na) в плазме крови определяли методом пламенной фотометрии, кальция в сыворотке крови - комплексонометрическим титрованием, неорганического фосфора - молибденовокислым способом (В.В.Меньшиков) [28].
Состояния свертывающей и противосвязывющей систем крови оценивали по аутокоагуляционному (АКТ) тесту (З.С. Баркаган) [2], определяли показатели А - свертывающую активность на второй минуте (%), МА - максимальную свертывающую активность (%), Т1 - время достижения половины максимальной свертывающей активности (в минутах), Т2 - время достижения максимальной активности (в минутах), ИИТ - индекс инактивации тромбопластина, как показатель активности антитромбина III (у.е), Ф - фибринолиз (в минутах), а также протромбиновый индекс - по Quick [167], фибриноген - по Rutberg. Состояние тромбоцитарного звена гемостаза характеризовали по количеству тромбоцитов в периферической крови, адгезивности и агрегации их (В.В.Меньшиков) [28].
Для характеристики неспецифических и специфических факторов защиты изучали содержание иммуноглобулинов (Ig) в сыворотке крови методом радиальной иммунодиффузии по Manchini с соавт. [138], содержание Т - и В - лимфоцитов (T-Pok, B-Pok) по методу Mendos с соавт. [142] в модификации Т.И.Гришиной и С.Мюллера [15], функциональное состояние (Та-Pок) - по методу Kerman с соавт. [114], субпопуляции (Т-хелперы, Т-супрессоры) - по C.Bianco с соавт., а фагоцитарную активность нейтрофилов - по количеству фагоцитирующих клеток (Д.В.Белокриницкий) [5], тесту с нитросиним тетрозолием (NСT-тест) - по G.Stuart в модификации В.С.Нагоева [30], активности миелопероксидазы (МП) и лизосомальных катионных белков (ЛКБ) в лейкоцитах (Р.П.Золотницкая) [28]; циркулирующие иммунные комплексы - по V. Haskhovа с соавт. [103] в модификации Ю.О.Гриневича и Н.Н. Алферова [13], уровень средних молекул (МСМ) - по Н.И.Габриэлян с соавт. [11].
Функциональное состояние почек при вовлечении их в процесс оценивали пробой по Зимницкому, уровням мочевины и креатинина в сыворотке крови и клиренсу эндогенного креатинина - по А.Гиттер, Л.Хейльмейер [12], привязанного к стандартной поверхности тела.
Определение эндотелина-1 в плазме крови проводили иммуноферментным методом с помощью тест-наборов фирмы "Amersham" (Англия). Взятие крови осуществляли в полипропиленовые пробирки, содержащие ЭДТА в концентрации 1мг/мл крови и апротинин (50 ед/мл крови). Все процедуры с кровью проводились при температуре 0оС. Пробы центрифугировали в течение 15 минут при 1600 g при температуре 0оС. Образцы полученной плазмы хранили при температуре от -40оС до -70оС не более месяца до проведения анализа.
Для экстракции пептида из плазмы к 1.5 мл плазмы добавляли 1.5 мл буфера А (представляющего собой 1 % раствор трифторуксусной кислоты). Центрифугировали образцы при 6000 об/мин в течение 20 минут при температуре 4оС. Наносили на колонку активированную буфером Б (60 % раствор ацетонитрата в 1 % трифторуксусной кислоты) 2 мл супернатанта, после чего промывали колонку буфера А (по 3.0 мл - дважды). Полученные образцы высушивали досуха в токе воздуха.
Высушенные экстракты растворяли в 250 мкл буфера для анализа, прилагаемого к набору. Анализ производили при температуре 5оС в течение 2-х дней. 1-й день: Все использованные реактивы уравновешивали при комнатной температуре и перемешивали перед использованием. Готовую серию стандартных разведений в диапазоне от 1
- Київ+380960830922