ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объект изучения - сукцифенат (натриевая соль
4-ацетилсукцинаниловой кислоты: - Ас С6Н4NНСО(СН2)2 СОО-Na+), синтезированный на кафедре органической химии Национального фармацевтического университета под руководством чл.-кор. НАН Украины, доктора химических, доктора фармацевтических наук, профессора В.П. Черных. Для проведения экспериментальных исследований использовали высокоочищенную субстанцию сукцифената в виде лиофилизированного порошка по 0,1 г в ампуле 2 мл производства ООО "Фармацевтическая компания "Здоровье" (Украина) для парентерального введения.
Нами изучено влияние сукцифената на тромбоцитарно-сосудистый, коагуляционный гемостаз, фибринолитическую активность крови в условиях in vivo и in vitro, механизмы гемостатического и антифибринолитического действия, эффективность гемостатического действия при экспериментальной патологии, фармакокинетика препарата, сопутствующие фармакологические эффекты, морфологические изменения внутренних органов животных при однократном и длительном применении сукцифената.
Эксперименты выполнены на 742 нелинейных половозрелых белых крысах обоего пола массой 180-220 г, 133 нелинейных половозрелых белых мышах обоего пола массой 20-22 г, 43 кроликах-самцах породы Шиншилла массой 2,5-3,1 кг.
Животные находились в виварии центральной научно-исследовательской лаборатории НФаУ (зав. - д. фарм. н., профессор Л.В. Яковлева) и содержались на обычном пищевом и водном рационе по 10-12 особей в стандартных металлических клетках.
Распределение животных по сериям экспериментов согласно задачам исследования приведено в таблице.
Таблица
Группировка экспериментальных исследований на животных
№
п/пСерии экспериментовКоличество и вид животных1231.Острая токсичность сукцифената
Острая токсичность ?-АКК78 нелинейных белых мышей обоего пола
90 нелинейных белых крыс обоего пола
72 нелинейных белых крысы обоего пола2.Эффективная доза сукцифената100 нелинейных белых крыс обоего пола3.Влияние сукцифената на тромбоцитарно-сосудистый гемостаз60 нелинейных белых крыс обоего пола4.Влияние сукцифената на коагуляционный гемостаз120 нелинейных белых крыс обоего пола
15 кроликов-самцов породы Шиншилла5.Влияние сукцифената на противосвертывающие механизмы20 нелинейных белых крыс обоего пола6.Влияние сукцифената на фибринолитическую активность крови30 нелинейных белых крыс обоего пола
15 кроликов-самцов породы Шиншилла1237.Изучение механизма антифибринолитического действия сукцифената8 кроликов-самцов породы Шиншилла8.Исследование фармакокинетики сукцифената5 кроликов-самцов породы Шиншилла9.Исследование кровоостанавливающего действия сукцифената при кровотечениях из резаных ран печени в условиях генерализованного повышения фибринолиза50 нелинейных белых крыс обоего пола10.Изучение гемостатического действия сукцифената на резаных ранах различных органов крыс90 нелинейных белых крыс обоего пола11.Исследование гемостатической активности сукцифената при кровотечении из язвы желудка30 нелинейных белых крыс обоего пола12.Антимикробная активность сукцифената15 нелинейных белых мышей обоего пола13.Изучение радиозащитной активности сукцифената40 нелинейных половозрелых белых мышей-самцов
20 нелинейных половозрелых белых крыс-самцов14.Морфологические изменения внутренних органов животных при длительном введении сукцифената60 нелинейных белых крыс обоего пола
Все причиняющие боль манипуляции были проведены под этаминал-натриевым (40 мг/кг внутрибрюшинно) или барбамиловым (60 мг/кг подкожно) наркозом ?80?.
Острую токсичность сукцифената изучали на 2 видах животных: нелинейных белых мышах массой 21±2 г и белых крысах массой
200±20 г обоего пола при внутрибрюшинном и внутрижелудочном введении [77]. До введения препарата подопытные животные 5 дней проходили акклиматизацию в условиях экспериментальной комнаты. Было поставлено 28 серий опытов на 168 животных. За день до эксперимента животных взвешивали. Крысы, которым сукцифенат планировали вводить перорально, голодали в течение ночи, мышей лишали корма за 4 часа до начала эксперимента. Внутрибрюшинно сукцифенат вводили мышам и крысам в дозах 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000 мг/кг массы животного. Внутрижелудочно сукцифенат вводили мышам в дозах от 2000 до 8000 мг/кг, крысам - от 3000 до 11000 мг/кг массы тела. Острую токсичность ?-аминокапроновой кислоты изучали на нелинейных белых крысах массой 200±20г обоего пола при внутрибрюшинном введении в дозах от 500 до 8000 мг/кг. Было поставлено 12 серий опытов на 72 животных.
На протяжении 14 дневного срока наблюдения оценивали общее состояние животных, динамику массы тела, цвет слизистых оболочек, температуру тела, учитывали количество погибших и выживших животных и определяли процент летальности в каждой серии.
Расчет среднесмертельной дозы проводили по методу Кербера (1931) ?162? используя формулу:
где DL100 - доза изучаемого вещества, которая вызывала гибель у всей группы животных;
z - среднее арифметическое из числа животных, у которых наблюдали учитываемую реакцию под влиянием каждых двух смежных доз;
d - интервал между каждыми двумя смежными дозами;
? (zd) - сумма среднеарифметических чисел;
n - количество подопытных животных в каждой группе.
При построении графика "доза - эффект" вычислена приближенная стандартная ошибка LD50 по формуле Гэддама. Стандарт распределения определяли по графику:
По формуле Гэддама
где K - константа - 0,564;
S - стандарт распределения;
d - интервал между каждыми двумя смежными дозами;
n - количество животных в каждой серии опыта.
Оценку токсичности проводили по общепринятой классификации К.К. Сидорова [164].
Эффективную дозу сукцифената определяли на модели резаной раны пече