РОЗДІЛ 2
Матеріали та методи дослідження
2.1. Формування дослідних груп та відбір матеріалу досліду
З врахуванням поставлених нами завдань були обрані напрямок, об'єкт та методи досліджень.
Експериментальна частина роботи була виконана на Луганському м'ясокомбінаті та в лабораторії кафедри біології тварин ЛНАУ протягом 1999 - 2001 років. Об'єктом дослідження були обрані передплоди і плоди великої рогатої худоби отримані при забою клінічно здорових корів середньої вгодованості, завезених з господарств Луганської області. Відбір проб від неонатальних телят здійснювали протягом 2001 - 2002 років в учбовому господарстві Луганського національного аграрного університету.
При формуванні дослідних груп враховували вік телят, що дало можливість виділити 9 вікових груп телят від 1,5 місяців ембріогенезу до народження. Було досліджено 9 предплодів, 85 плодів та 6 неонатальних телят.
При відборі передплодів і плодів також враховували породу корів, що дало можливість встановити 3 основні породні групи, які розводять у Луганській області, а саме: червона степова (ЧС), чорно - ряба (ЧР) і симентальська (СМ). Кількісне співвідношення груп склало відповідно 36, 32 і 32 теляти (табл. 2.1).
Вік передплодів і плодів визначали за критеріями, викладеними Г.О. Шмідтом [28,44] і А.П. Студенцовим [75]. Для цього їх зважували, вимірювали довжину тулуба, описували стан волосяного покриву. Породні особливості показників внутрішньоутробного росту телят уточнювали за даними А.Х. Баранової (1969) [37], М.Ф. Митрофанової, Ю.Я. Хайнацького [38], Г.Н. Телєгіна [40] - по червоній степовій породі, В.Є. Геруса [27] - по чорно - рябій та Л.Ф. Барвенко [42] - по симентальській породах. Уточнювання віку також проводили за рахунок даних Г.Д. Каци (1990, 2000, 2001) [81-83] про внутрішньоутробний морфогенез шкіри великої рогатої худоби.
Кількісна характеристика досліду представлена у табл. 2.1.
Таблиця 2.1
Кількісна характеристика і схема досліду
№ п/пВік, міс.Кількість голів в кожній
групі з урахуванням породиДосліджені показникиЧСЧРСМРазом1.23339Показники росту: маса, довжина тулуба, довжина п'ясткових кісток. Встановлено абсолютний та відносний прирости цих показників.
Показники морфогенезу шкіри: товщина шарів; глибина залягання волосяних фолікулів, потових та сальних залоз; кількість волосяних фолікулів на одиниці площі 1мм2; площа секреторних відділів потових та сальних залоз.
Клітинний склад базального шару епідермісу і підепітеліальної зони шкіри: відносне співвідношення та абсолютна кількість імунокомпетентних клітин на умовній площі 10000 мкм2.2.3445133.4666184.5444125.6433106.7624127.8334108.9343109.Н33-6Разом:363232100 Примітки:
1. Н - новонароджені телята;
2. ЧС - телята червоної степової породи,
ЧР - чорно-рябої та СМ - симентальської порід.
2.2. Методи дослідження росту тварин
Вивчення загальної динаміки вагового та лінійного росту шкіри - як самого значного по масі і розмірам органа, проводили шляхом аналізу вагових та лінійних вимірів передплодів, плодів та неонатальних телят.
Передплоди зважували на вагівницях ВР-5 та ВР-100 з точністю до 0,05 грама. Плоди зважували на ВР-100, КЗФ-200 та УЦК 1-500/1000-10-0,5-1 з точністю відповідно 1 г та 50 г.
Лінійний ріст телят визначали вимірюванням довжини тулуба та п'ясткової кістки. Ці вимірювання дають можливість характеризувати ріст осьового та периферійного скелету, або його ріст у сегментарній та фронтальній площинах. Довжину тулуба визначали вимірювальною стрічкою від гребеня потиличної кістки до кореня хвоста з точністю до 0,1 см. Довжину відпрепарованої п'ясткової кістки визначали лінійкою від проксимального до дистального епіфізів з точністю до 0,1 см.
Отримані дані росту телят обробляли статистично на персональному комп'ютері за допомогою програми "Gesta".
Закономірності вагового та лінійного росту телят характеризували показниками абсолютного та відносного приросту маси або довжини за віковий відрізок часу, що дає можливість встановити, протягом пренатального онтогенезу, періоди з більш або менш інтенсивними процесами росту.
Приріст визначали використовуючи загальноприйняту методику, висвітлену К.Б Свєчиним (1976) [1], за формулою:
АП = WК - WП ;
ВП = ((WК - WП) : 0,5 (WК + WП)) ? 100
де АП та ВП - абсолютний та відносний приріст;
WК та WП - маса або довжини плодів (предплодів) з початку
та наприкінці вікового відрізку.
2.3. Гістологічні методи дослідження шкіри тварин
2.3.1. Методи дослідження морфологічних структур шкіри. З метою вивчення морфогенезу шкіри використовували методику Г.Д. Каци [82]. Зразки шкіри відбирали зразу після виділення ембріона з плідних оболонок на середині бокової частини грудного відділу тулуба, з правого боку. При цьому використовували спеціальний пробовідбірник. Біоптати шкіри фіксували в 10% водному розчині нейтрального формаліну протягом доби та заливали у желатин. Для цього після промивання в проточній воді протягом 15 годин їх поміщали на 24 години в 18% розчин желатину при температурі +370С. Надалі переносили на 3 години в 25% розчин желатину та робили блоки. Для ущільнення і зберігання блоки розміщували в 5% розчин формаліну на 3 доби. Після цього шматочки шкіри очищали від залишку желатину, промивали 15 хвилин в проточній воді та переносили в дистильовану воду.
Желатинові зрізи виготовляли на заморожуючому мікротомі. Горизон-тальні зрізи робили паралельно поверхні шкіри на різному рівні товщиною 15 - 20 мкм, а вертикальні - вздовж волосяних фолікулів, товщиною 20 - 30 мкм. З ножа мікротома зрізи переносили в дистильовану воду.
Фарбування проводили гематоксиліном Карачі та Суданом ІІІ за схемою:
- зрізи поміщали у 500 спирт на 2 хвилини;
- потім у фарбу судан ІІІ - 3 хвилини;
- знову в 500 спирт - 1 хвилину;
- промивали в дистильованій воді