РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ.
Експериментальні спостереження були проведені на 87 білих щурах вагою 150 - 200 г. віком 4 - 5 місяців. Згідно поставлених завдань, тварини були розподілені на 5 груп (табл.1).
Таблиця 1
Термін дослідження (тижні)Всього 3612 Контрольна група тварин55515 Тварини, яким проводилась МЛТ у червоному спектрі з частотою модуляції 9,4 Гц66618 Тварини, яким проводилась МЛТ у червоному спектрі з частотою модуляції 37, Гц66618 Тварини, яким проводилась МЛТ у інфрачервоному спектрі з частотою модуляції 9,4 Гц66618 Тварини, яким проводилась МЛТ у інфрачервоному спектрі з частотою модуляції 37,5 Гц66618 Всього29292987
Перша група - тварини, яким було проведено операцію з моделювання стандартної травми периферійного нерва (15 щурів);
Друга група - 18 щурів, яким виконували операцію з моделювання стандартної травми периферійного нерва та проводили частотно-модульовану магнітолазеротерапію у червоному спектрі з частотою модуляції 9,4 Гц.
Третя група включала 18 щурів, яким виконували операцію з моделювання стандартної травми периферійного нерва та проводили частотно-модульовану магнітолазеротерапію у червоному спектрі з частотою модуляції 37,5 Гц.
Четверта група - 18 щурів, яким виконували операцію з моделювання стандартної травми периферійного нерва та проводили частотно-модульовану магнітолазеротерапію в інфрачервоному спектрі з частотою модуляції 9,4 Гц.
П'ята група включала 18 щурів, яким виконували операцію з моделювання стандартної травми периферійного нерва та проводили частотно-модульовану магнітолазеротерапію у інфрачервоному спектрі з частотою модуляції 37,5 Гц.
Операція з моделювання стандартної травми периферійного нерва полягала у наступному: втручання проводили під тіопенталовим наркозом, який вводили інтраперитонеально в дозі 5 мг сухої речовини на 100г маси тварини (препарат розводили в ізотонічному розчині хлориду натрію). Оперативне втручання проводили в асептичних умовах за допомогою мікрохірургічного інструментарію під оптичним збільшенням 8х. Доступ до сідничого нерва виконувався на межі середньої та верхньої третини стегна за його проекційною лінією. Після обробки операційного поля розтинались м'які тканини, а потім тупо за допомогою затискача виділяли сідничний нерв. Останній пересікався лезом безпечної бритви у вищезгаданій ділянці на межі верхньої та середньої третини стегна. Відрізки нерва співставляли на відстані 2-3 мм, а потім накладали епіневральні шви у кількості 2-3 атравматичною голкою монофіламентною з поліамідною ниткою 10/0 фірми Ethicon. Після проведення гемостазу рану ретельно зашивали. Дослідні тварини отримували однакове харчування згідно норм віварію і знаходились в однакових умовах.
Друга, третя, четверта і п'ята групи тварин підлягали аналогічній операції, після чого на наступний день їм проводилась черезшкірна частотно модульована магнітолазеротерапія (МЛТ) на ділянку пошкодженого нерва в різних світлових спектрах та з різною частотою модуляції протягом 10 діб. З цією метою використовувався серійний прилад "МІТ - 11" вітчизняного виробництва фірми НМЦ "Медінтех". Цей апарат має свідотство про державну реєстрацію Державного департамента з контролю за якістю, безпекою та виробництвом лікарських засобів і виробів медичного призначення МОЗ України за № UA 1.003.0098031-05, виданий Державним комітетом України з питань технічного регулювання та споживчої політики. Особливістю цього приладу є те, що його магнітні індуктори поєднані з лазерним випромінювачем в одному терміналі. Це дозволяє одночасно впливати МП і ЛВ на необхідну ділянку.
Параметри, що передбачені в конструкції приладу:
- напруга МП- до 100 мТл
- потужність ЛВ- до 100 мВт
- довжина хвилі ЛВ :
- 0,67 мкм (червоний діапазон)
- 0,78 мкм (інфрачервоний діапазон)
- частота модуляції МП і ЛВ - від 1 до 100 Гц
Необхідна доза для проведення 1 сеансу МЛТ розраховувалась за відомою формулою :
t = (ES / P) K,
де t- час впливу, с; E- необхідна енергія для опромінення зони, Дж/см2; S- площа зони впливу, см2; Р- потужність лазерного випромінення, Вт; К- коефіцієнт віддзеркалення. Відповідно для ЛВ у червоному діапазоні спектра вона становила 4 хв., у інфрачервоному- 2хв. МЛТ проводилась на ділянку пошкодження нерва та проксимальний і дистальний його відрізки. Тваринам контрольної групи після пересічення і зшивання нерва МЛТ не проводилось.
Післяопераційні рани усіх тварин загоїлись первинним натягом. Летальних випадків тварин не було.
Тварин виводили з експерименту через 3, 6 та 12 тижнів за допомогою передозування препарату Тіопентал (25мг/100г) при інтраперитонеальному введенні та давали летальну дозу ефіру. Евтаназію експериментальних та контрольних тварин виконували згідно міжнародних нормативів гуманного ставлення до тварин [54, 69, 128].
Матеріалом для дослідження були центральні (проксимальні) відрізки, невроми та периферійні (дистальні) відрізки пошкодженого нерва.
Для світлової мікроскопії матеріал фіксували у 10% розчині формаліну, промивали та отримували зрізи на заморожуючому мікротомі, які потім імпрегнували азотнокислим сріблом за Рассказовою. Для вивчення сполучної тканини препарати забарвлювали азур II - еозином.
Для морфометричного аналізу використовували напівтонкі поперечні зрізи нервів, виготовлені на ультратомі LKB і забарвлені толуїдиновим синім.
У даному дослідженні визначали такі величини: об'єм волокон в об'ємі нерва (%), кількість нервових волокон в одиниці об'єму нерва, (мкм3), площу поперечного зрізу нервового волокна (мкм2), площу поперечного зрізу осьового циліндру (мкм2), товщину мієлінової оболонки (мкм2).
При статистичному аналізі морфометричних даних обчислювали середні значення величин, середнє квадратичне відхилення, похибку середньої, коефіцієнт варіації, коефіцієнт точності визначення середньої у відповідності до рекомендацій, я
- Київ+380960830922