ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для реализации поставленных в работе задач нами были изучены и проанализированы данные официальной отчетности за период 1970-2005 гг. и проведено серологическое обследование различных групп населения Украины.
Материалами для изучения тенденций развития эпидемического процесса при вирусных гепатитах явились данные официальной статистической отчетности, утвержденные МЗ Украины, а также соответствующие отчетные формы Киевской городской и Центральной санитарно-эпидемиологических станций (СЭС):
1. Форма 1 - "Звіт про окремі інфекції і паразитарні захворювання" (ежемесячная).
2. Форма 2 - "Звіт про окремі інфекції і паразитарні захворювання" (годовая).
3. Форма 5 - "Звіт про профілактичні щеплення" (годовая).
4. Форма 6 - "Звіт про контингент дітей і підлітків, яким здійснено щеплення проти інфекційних захворювань" (годовая)
5. Форма 40-здоров - "Звіт про роботу санітарно-епідеміологічної станції"
Также были проанализированы данные ежегодного справочника "Діяльність закладів служби крові України" за период 1998-2005 гг.
2.1. Контингенты обследованных и исследуемый материал
Было проведено серологические исследования сывороток крови беременных, контрольных групп населения, групп риска по инфицированию ВГВ и ВГС, различных групп новорожденных и детей. Распространенность маркеров инфекций, вызываемых ВГВ и ВГС, определяли у беременных в регионах Украины с различной интенсивностью ЭП - гг. Киев, Луцк, Одесса и Полтава. Сыворотки крови ВИЧ-инфицированных беременных и детей, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями, были получены из регионов Украины с различной интенсивностью распространения ВИЧ-инфекции. Исследования образцов сывороток крови здоровых новорожденных, детей с врожденной патологией печени и их матерей проводили в г. Киеве.
Для установления корреляционной связи между распространенностью инфекций, передающихся половым путем, ГВ и ГС, в рамках проекта "Впровадження сучасних методів епідеміологічного нагляду за ВІЛ в Україні" при содействии Детского фонда Организации Объединенных наций в Украине - ЮНИСЕФ и финансовой поддержки Объединенной программы ООН СПИД - ЮНЕЙДС было проведено исследование по изучению распространенности ИППП среди беременных и женщин секс-бизнеса. Кроме того, наличие у беременной ИППП косвенно указывает на возможность нарушения целостности плацентарного барьера и существование высокого риска трансплацентарной передачи возбудителей. Было исследовано 900 сывороток крови беременных и 644 - женщин, предоставляющих сексуальные услуги за деньги (ЖСБ). В качестве маркеров ИППП у беременных определяли антитела к хламидийному антигену, в сыворотках крови ЖСБ - антитела к хламидийному антигену и к бледной трепонеме.
Объектами исследования были наиболее эпидемиологически значимые маркеры инфицирования ВГВ и ВГС, определяемые в сыворотках крови. Для инфекции, вызванной ВГВ, это были: HBsAg и анти-HBc (суммарные антитела). Данные о количестве проведенных исследований и определяемых маркерах в изучаемых группах представлены в табл. 2.1.
Таблица 2.1
Контингенты обследованных и объемы серологических исследований с определением отдельных маркеров
ГруппыОпределяемые маркерыHBsAgАнти-НВсАнти-HCVAb Chl. Tr.Ab Trep. Pal.Количество исследованийБеременные 166825681668900-ВИЧ-инфицированные беременные413413413--Новорожденные183-183--Дети, рожденные ВИЧ-инфицированными матерями977742977--Новорожденные с клинико-биохимическими признаками гепатита188188188--Матери новорожденных с клинико-биохимическими признаками гепатита188188188--Доноры крови701401701--Медицинские работники115511551155--Пациенты отделений соматических стационаров:
- кожно-венерологического
- гастроэнтерологического
- гинекологического
846
572
266
266
846
572
266
-Больные вирусным гепатитом172172172--Потребители инъекционных наркотиков184-184--Женщины секс-бизнеса-644-644644Проведено исследований7513654975131544644Всего 23763
2.2. Серологические методы исследования
Серологические исследования проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием коммерческих тест-систем в соответствии с инструкциями производителей. Позитивные результаты первичного исследования на HBsAg и анти-HCV подтверждали с помощью конфирматорных (подтверждающих) тестов. Подтверждающие исследования на HBsAg проводили как с использованием коммерческих тестов, так и при помощи методики конкурентного ИФА (см. ниже). Положительные результаты скрининга на анти-HCV подтверждали повторным исследованием в тест-системах той же генерации, но другого производителя или с помощью конфирматорных тест-систем, в качестве которых использовали диагностикумы, основанные на нейтрализации антигена высокоочищенными антителами ("ДиаПрофМед", Украина) и тест-системы с раздельно сорбированными на твердой фазе антигенами ВГС ("Диагностические системы", Россия), что позволяет определять антитела к структурным и неструктурным вирусным белкам (Cor, NS3, NS4, NS5). Использованные для определения маркеров инфицирования ВГВ, ВГС и ИППП коммерческие тест-системы и их производители указаны в табл.2.2.
Для усовершенствования методов специфической лабораторной диагностики ВГ была определена эффективность используемых методов подтверждающих исследований на HBsAg и анти-HCV в различных группах населения: здоровые взрослые, доноры крови, медицинские работники, больные вирусным гепатитом, ВИЧ-инфицированные др.
Исследования проводили на стандартном оборудовании для ИФА производства Sanofi Diagnostics Pasteur: вошер (прибор для промывания планшетов) PW-40 и спектрофотометр PR-2100.
Таблица 2.2
Тест-системы, использованные в работе для определения серологических маркеров инфицирования
Маркер Тест-система (изготовитель)Подтверждающие исследования:
тест-система (изготовитель)HBsAgD