Лептоспироз в Республике Мали и идентификация лептоспир

V,
СОДЕРЖАНИЕ
Стр.
ВВЕДЕНИЕ ....................«•••••••••••.••.................. 4
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.................................. 9
1.1. Общие сведения ........................... 9
1.2. Распространенность лептоспироза в
странах Африки..................................... 13
1.3. Климато-географические и экономические особенности Республики Мали............................. 25
1.4. Дифференциация лептоспир........................... 34
* 1.5. Молекулярные аспекты организации
лептоспир.......................................... 39
I
5 1.6. Использование некоторых современных методов
анализа для ускоренной идентификации инфекционных агентов, в том числе лептоспир 43
ГЛАВА П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.............................. 58
2.1. Материалы и методы исследования.................... 58
2.1.1. Культивирование лептоспир...................... 58
2.1.2. Серологические исследования.................... 61
2.1.3. Выделение ДНК ................................ 64
2.1.4. Подбор праймеров и постановка
* я модификации .............................. 65
2.1.5. Спектрофотометрическая оценка концентрации и чистоты ДНК и праймеров 67
2.1.6. Электрофорез в агарозном геле ................. 68
2.1.7. Идентификация лептоспир........................ 69
- З -
*
ГЛАВА ill. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ..................................71
3.1. Характеристика роста исследуемых штаммов
лептоспир ............................................. 71
3.3. Распространенность лептоспироза в Рес-
' публике Мали.......................................... 73
3.3. Этиологическая структура лептоспироза крупного рогатого скота в Республике
Мали .................................................. 81
3.4. Подбор праймеров для использования полимеразной цепной реакции...................................... 87
3.5. Первичные испытания праймеров и подбор условий для постановки полимеразной цепной реакции ................................................. 99
3.6. Проверка специфичности праймеров и оценка чувствительности метода на препаратах ДНК l. interrogans и других микроорганизмов ..................................................... 104
3.7. Отработка метода постановки полимеразной цепной реакции на препаратах бактериальной массы Ь. interrogans ................................... 105
3.8. Оценка работы метода в модельной системе
• при исследовании образцов бакмассы
L. interrogans, разведенных в моче ............... 109
ГЛАВА ІУ. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ...................... III
ВЫВОДЫ............................................................. 119
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.......................................... 121
ЛИТЕРАТУРА......................................................... 122
•
- 12 -
в том числе овощей и зелени, инфицированных лептоспирами (B.C. Ростомян, 1975; В.В.Мефодьев, Г.Н.Пекло, 1979; И.Е.Троп, 1983; В.И.Терсклх, И.Л.Коковин, 1964 и др.).
Наиболее благоприятной средой для сохранения лептоспир вне организма являются вода открытых водоемов, влажная почва с pH близкой к нейтральной (В.С.Киктенко, 1954; М.В.Земсков, I960;
В.В.Ананыш, 1971; Е.П.Бернасовская, 1978; Л Л. Лесников, 1982).
Лептоспиры проникают в организм животных и человека через поврежденные участки кожи и слизистые оболочки ротовой полости, носа, глаз, половых путей (В.И.Сосницкий, 1976; Т.В.Бобылкова, 1979).
Территории, на которых выявляются зараженные лептоспирами лвди или животные, называются лептоспирозными эпизоотическими очагами. Различают природные и антропургические (хозяйственные) очаги, территориальная приуроченность которых определяется кли-мато-географическими условиями и ареалом основных хозяев данного серовара лептоспир.
В природных очагах лептоспиры паразитируют на мелких млекопитающих из отряда грызунов, насекомоядных, хищных и сумчатых. Природные очаги являются по своему происхождению более древними.
В антропургических (сельскохозяйственных) очагах лептоспиры паразитируют на сельскохозяйственных животных и синантропных грызунах.
1.2. РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ ЛЕДТ0СПИР03А В СТРАНАХ АФРИКИ
Знание распространенности и этиологической структуры лепто-спироза, т.е. перечня сероваров лептоспир, поражающих сельскохозяйственных и диких животных в каждом регионе мира, необходимо для успешной диагностики,специфической профилактики, исключения завоза новых сероваров в страну.
Патогенные лептоспиры существуют в природе в форме многочисленных сероваров, каадьгй из которых паразитирует на теплокровных животных определенного вида или видов, являющихся его основными хозяевами (резервуарами) в природе. Все серовары распространены в природных и сельскохозяйственных очагах, территориальная приуроченность которых определяется климато-географическими условиями и ареалом обитания основных хозяев данного серовара лептоспир.
По материалы секретариата ФАО, лептоспироз крупного рогатого скота, собак и свиней зарегистрирован на всех континентах и во многих странах. Меньше всего информации имеется об Африканском континенте, хотя значительное количество сероваров в прежние годы было выделено в экваториальной Африке (Ю.А.Малахов, 1992).
Впервые обзор о лептоспирозе в Африке был сделан (B*rdes and Rivaeie) на медицинском конгрессе в Марселе в 1938 г.
Предположения клиницистов Сенегала о наличии в стране болезни Васильева-Вейля подтверждены A.Le*er и В.СежтаЗл
(1918), которым удалось выделить лептоспир от крыс, отловленных в Дакаре. р.и*е и a. Esquer (1920) выделили лептоспир
из печени погибшего от "лихорадки черной воды". Следующий случай