Исследование фитопрепаратов и оценка их качества с использованием специфических ферментных биотест-систем in vitro

2
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ............................................................5
Глава 1. Обзор литературы..........................................10
1.1 Определение качества лекарственных препаратов..................10
1.1.1 .Химические методы.........................................11
1.1.2 Физико-химические методы...................................13
1.1.3 Биологические методы.......................................18
1.2 Специфические ферментные биотест-системы in vitro..............24
1.2.1 Глутатионредуктаза и глутатионредуктазная биотест-система in vitro ................................................................24
1.2.2 Каталаза и каталазная биотест-система in vitro.............27
1.2.3 НАДФ Н-оксидаза и НАДФ Н-оксидазная биотест-система in vitro ...29
1.3 Адаптогены и синдром хронической усталости.....................33
1.3.1 Элеутерококк и его применение в медицине...................36
1.3.2 Женьшень и его применение в медицине.......................37
1.3.3 Левзея и ее применение в медицине..........................38
1.3.4 Крапива и ее применение в медицине.........................39
1.3.5 Зверобой и его применение в медицине.......................44
1.4 Синдром хронической усталости..................................46
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ............................................50
Глава 2. Материалы и методы исследования...........................50
2.1 Материалы....................................................50
2.2. Методы исследования.........................................54
2.2.1. Спектрофотометрическое определение активности глутатионредуктазы..............................................54
2.2.2. Спектрофотометрическое определение активности каталазы 55
2.2.3. Получение гомогената лейкоцитов...........................56
3
2.2.4. Спектрофотометрическое определение НАДФН-оксидазной активности гомогенатов полиморфноядерных лейкоцитов и
перитонеальных макрофагов.........................................56
2.3. Методика изучения работоспособности и выносливости на животных57
Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение....................58
ЗЛ.Выбор оптимальных условии получения экстракта крапивы с выраженными адаптогенными и иммуномодулирующнми свойствами с помощью специфических ферментных биотест-систем in vitro............58
3.1.1 Получение сухих экстрактов крапивы на 20, 30 и 40% спирте этиловом ..................................................................58
3.1.2 Оценка биологической активности экстрактов крапивы с помощью специфических ферментных биотест-систем in vitro..................59
3.2. Оценка качества разных партий растительного сырья по целевой биологической активности с помощью специфических ферментных биотест-систем in vitro.............................................65
3.3. Влияние сухих экстрактов женьшеня, элеутерококка, левзеи и крапивы при системном введении на физическую работоспособность и выносливость........................................................72
3.4. Исследование целевой биологической активности композиций сухих экстрактов с помощью глутатионредуктазной, каталазной и НАДФ-Н-оксидазной биотест-систем in vitro..................................76
3.5. Исследование применения специфических ферментных биотест-систем in vitro для оценки качества БАВ биотехнологического происхождения.......................................................81
3.6. Статистическая обработка данных................................83
Заключение.........................................................84
Выводы.............................................................89
Литература.........................................................91
9
Практическая значимость
Специфические ферментные биотест-системы in vitro отличаются высокой информативностью, воспроизводимостью, быстротой получения результатов. Они позволяют выявлять целевую биологическую активность образцов без использования животных и могут быть применены в качестве методов выбора для подбора оптимальных условий извлечения из растений веществ с целевой биологической активностью, для первичной оценки качества растительных экстрактов, для оценки качества клеточных культур как продуцентов Б AB.
Глутатионредуктазная, каталазная и НАДФН-оксидазная тест-системы in vitro могут быть использованы в фармации для первичной оценки адаптогенной, антиоксидантной, противомикробной и
иммуномодулирующей активности и отбора наиболее активных образцов.
Полученные результаты использовались в ВИЛАР при создании нового препарата с адаптогенными свойствами.
Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения; трех глав; заключения; выводов; списка литературы, содержащего 155 источника; 8 рисунков и 12 таблиц. Общий объем работы составляет 106 страниц машинописного текста.
10
Глава 1. Обзор литературы.
1.1 Определение качества лекарственных препаратов
Контролю качества лекарственных средств придается серьезное значение во всем мире, так как речь идет о жизни и здоровье миллионов людей. Основная специфика всей фармацевтической деятельности заключается именно в обеспечении эффективности, безопасности и конкурентоспособности изготовляемых и реализуемых лекарственных препаратов, что гарантируется главным образом высоким их качеством.
Требования по обеспечению качества лекарственных средств предъявляются с давних пор. Так, еще в Аптекарском уставе, который датируется 1789 г., было записано: «Аптекарь повинен иметь крайнее старанее, чтобы лекарства составляемы были вещами и весом точно по предписанию врача, дабы тем отвращена была всякая погрешность, подвергающая больного здоровье и жизнь опасности, а врача доброе имя бесславию» (Варадинов H., Аптекарский устав. -СПб., 1880, XXXIII) [82].
В настоящее время существует множество методик, позволяющих оценить качество сырья, полупродуктов, а также фармацевтических препаратов по химической и биологической активности. Как правило, применяются методики, регламентируемые ГФ XI изд., которые основываются на изучении химических, физико-химических и биологических свойств исследуемого образца [26].
По объективным причинам в специализированных фармацевтических изданиях не удается подробно охарактеризовать методы, в которых стадия интерпретации получаемой аналитической информации характеризуется повышенной сложностью: в частности, все современные инструментальные хромато-спектральные методы. Как правило, здесь требуется обращение к