2
СОДЕРЖАНИЕ
Стр.
1. ВВЕДЕНИЕ 4
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
2.1. Характеристика Bacillus anthracis 9
2.2. Антигенная структура В. anthracis 12
2.3. Диагностика 21
2.4. Открытие и практическое использование реакции преципи- 25
тации
2.5. Способы и методы изготовления преципитирующей сибире- 28
язвенной сыворотки
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 35
3.1. Материалы и методы 35
3.1.1. Материалы 35
3.1.2. Методы 37
3.2. Разработка методов получения преципитирующей сибире- 41
язвенной сыворотки и стандартного сибиреязвенного бактерийного антигена с использованием культуры вакцинного штамма антракса
3.2.1. Изучение состава термостабильных преципитирующих ан- 41
тигенов у вирулентных и аттенуированных штаммов
3.2.2. Изучение возможности использования культуры вакцинного 45
штамма антракса для изготовления преципитирующей сибиреязвенной сыворотки
3.2.3. Изучение акгивности и специфичности преципитирующей 51
сибиреязвенной сыворотки в процессе хранения
з
3.2.4. Изучение возможности использования культуры вакцин- 55
ного штамма антракса для изготовления стандартного сибиреязвенноного бактерийного антигена
3.2.5. Активность и специфичность опытно-промышленных серий 59
антигена сибиреязвенного бактерийного стандартного, изготовленных из культур вакцинных бескапсульных штаммов
34Б2 и 55-ВНИИВВиМ
3.2.6. Изучение активности и специфичности стандартного сиби- 63
реязвенного бактерийного антигена в процессе хранения
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
67
5. ВЫВОДЫ
72
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
73
7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
75
8. ПРИЛОЖЕНИЯ
88
11
0,8-1,0 мкм. При образовании споры находятся в центре палочки, не превышая поперечника клетки (Колесов С.Г., 1976).
В сухом остатке вегетативных клеток бацилл содержится 6,80 % азота и 12,00-13,50 % минеральной золы, в сухом остатке спор - соответственно 12,14 и 41,15 %. Клетки сибирской язвы образуют ферменты липазу, диастазу, протеазу, желатиназу, дегидрадазу, цитохромоксидазу, пероксидазу, каталазу, аргиназу и др. (Ипатенко Н.Г., 1996). Споры содержат аланинра-целазу, нуклеозидрибозидазу, аденозиндезаминазу.
Одним из основных факторов патогенности возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis является бинарный трехкомпонентный экзотоксин, который образуется в процессе жизнедеятельности микроба in vivo. Экзотоксин также можно получить in vitro на специальных средах. Его продуцируют как вирулентные, так и авирулентные (бескапсульные) штаммы возбудителя сибирской язвы (Г.В. Дунаев, 1972).
Сибиреязвенный токсин (экзотоксин) состоит из трех отдельных белков - протективного (иммуногенного) антигена (РА, фактор II), летального (LF, фактор III) и отечного (эдематогенного, воспалительного) (EF, фактор I) - факторов с молекулярной массой 85, 83 и 89 кД соответственно. Все три компонента сибиреязвенного экстрацеллюлярного токсина обладают антигенными свойствами и серологически активны (Бакулов И.А., 2001; Т.С. Dixon, 1999).
При изучении химической природы факторов сибиреязвенного токсина было установлено, что II и III факторы являются гетерогенными в молекулярном отношении протеинами, а I фактор - липопротеином (D.C. Fisch, R.E.LincoIn, 1967; A.Buzzell, 1967; М.Н.Wilkie, М.К. Ward, 1967; D.C. Fisch et al., 1968). Было установлено, что I фактор содержит 12 % азота, 6,2 % золы, 6,4 % углеводов, 0,7 % фосфора и менее 3 % липидов, соответственно II фактор - 13,9 % азота, 1,6 % золы, 3,7 % глюкозы, 0,2 % фосфора.
В очищенном препарате III фактора обнаружено до 90 % протеина, и до
15,1 % азота, 0,2 % золы, меньше 0,5 % глюкозы и 0,05 % фосфора (J. L.
12
Stanley, K. Sargeant, H. Smith, 1960; J. L. Stanley, H.Smith, 1961; H. Smith, J.
L. Stanley, 1962; N.Stamatin, 1964).
С целью выяснения иммуногенности каждого из трёх названных компонентов сибиреязвенного токсина N.Eckert, P.F. Bonventre (1963);
V.G.Mahlandt с соавт. (1964) провели экспериментальную работу на морских свинках и крысах. Они установили, что фактор III обладал выраженными иммуногенными свойствами и защищал против заражения спорами возбудителя антракса оба вида животных, а также и против заражения крыс полным комплексом токсина. Фактор II иммунизировал против заражения спорами крыс и морских свинок, но оказался не иммуногенным при заражении токсином крыс. Фактор I не обладал иммунизирующими свойствами, однако с помощью реакции иммунодиффузии в геле в сыворотке крови морских свинок обнаружены антитела, титры которых не превышали 1 :4, 1 : 8. Это подтверждается работами Leppla S.H., 2002; Linie S.F., 2004; Reu-veny S., 2001; Modyeri M., 2003.
2.2. Антигенная структура Bacillus anthracis
Антигенная структура возбудителя сибирской язвы продолжает интересовать исследователей и в настоящее время. В составе оболочки и капсулы сибиреязвенного микроба обнаружены три антигенных комплекса:
- поверхностные антигены капсулы, являющиеся, по-видимому, пептидами, чувствительные к действию трипсина, хемотрипсина, гиапуронида-зы и лизоцима;
- собственно капсульные антигены, расположенные в основном слое капсулы, содержат вещества белково-полисахаридной природы, чувствительные к действию трипсина, хемотрипсина, гиалуронидазы и лизоцима;
- антигены оболочки клетки, содержащие вещества полисахаридной и белковой природы, чувствительные к действию лизоцима и трипсина.
По данным Е.Н. Левиной и Л.Н. Кац (1966), антигены, обнаруживаемые с помощью флюоресцирующей сибиреязвенной сыворотки, локализованы в оболочке.
- Киев+380960830922