Ви є тут

Ефект хронічного прикладання німодипіну на кальцієвий гомеостаз у нейронах дорсального рогу спинного мозку щурів за умов ровитку діабетичної нейропатії.

Автор: 
Шутов Леонід Павлович
Тип роботи: 
Дис. канд. наук
Рік: 
2006
Артикул:
0406U001547
129 грн
Додати в кошик

Вміст

РАЗДЕЛ 2. Материалы и методы исследований
Метод получения экспериментального диабета
Во всех экспериментах мы использовали самцов крыс линии Вистар. Для получения
экспериментального диабета животным на 21-й день после рождения производилась
внутрибрюшинная инъекция 1 мл раствора стрептозотоцина (streprozotocin
(N-[methylnitrosocarbamoyl]-D-glucosamine), Sigma, США) в 0.9-ти процентном
растворе NaCl (изотонический 0.9% раствор для инъекций, Галичфарм, Львов,
Украина), в концентрации из расчета 80 мг на кг веса животного. Через сутки
производилась повторная инъекция. На протяжении всего периода наблюдений как
стрептозотоцин – инъецированные, так и контрольные животные такого же возраста,
содержались в идентичных условиях, на одинаковой диете.
Через 3 недели после первой инъекции стрептозотоцина измерялся уровень глюкозы
в плазме крови животных. Концентрация глюкозы в крови, взятой из хвостовой
вены, измерялась при помощи оптического комбинированного сенсора-калькулятора
глюкозы Глюкотренд (Roche Diagnostics GmbH., Mannheim, Германия). Концентрация
глюкозы в плазме крови контрольных животных находилась в пределах 5 - 9 мМ.
Если у стрептозотоцин-инъецированного животного концентрация глюкозы превышала
15 мМ, мы считали, что у животного развился стрептозотоцин – индуцированный
диабет.
2.2 Обработка экспериментальных животных нимодипином и эналаприлом.
После установления факта наличия гипергликемии (на 21-й день после инъекции
стрептозотоцина), стрептозотоцин-диабетические животные разделялись на четыре
группы. Первая группа начинала ежедневно в течение трех недель получать с пищей
нимодипин (Nimodipine, Sigma, США) из расчета 40 мг на 1 кг веса животного. Для
обеспечения гарантированного приёма препарата экспериментальными животными
использовалась приманка (творог, 5г). Нимодипин в условиях затемнения
равномерно распределялся по всему объему приманки, которая в течение 1-2 минут
скармливалась стрептозотоцин-диабетическим животнным. Через три недели терапии
(через 6 недель после первой инъекции стрептозотоцина) животные брались в
эксперимент. Вторая группа стрептозотоцин-диабетических животных всё это время
в идентичных условиях получала эналаприл из расчета 5 мг на 1 кг веса
животного, третья группа получала пустую приманку. Четвертая группа не получала
приманки и находилась на обычной диете.
Контрольных животных соответствующего возраста мы разделили также на четыре
группы, условия содержания и питания которых соответствовали таковым у
стрептозотоцин-диабетических животных: первая группа получала нимодипин с
приманкой, вторая – эналаприл, а третья группа получала пустую приманку.
Четвертая группа не получала приманки и находилась на обычной диете.
Все эксперименты с животными были утверждены и проводились в полном
соответствии с требованиями Клиники подопытных животных Института физиологии
им. А.А.Богомольца НАН Украины.
2.3 Методы исследования нарушений сенсорной чувствительности
2.3.1. Метод «горячая поверхность»
Для изучения болевых реакций крыс на термический стимул, а также определения
порога болевой термической чувствительности мы применяли метод "горячая
поверхность". Мы создавали ноцицептивный стимул помещая экспериментальное
животное на поверхность, разогретую до температуры, которая вызвала болевую
реакцию. С целью реализации возможности проведения данного эксперимента,
инженером Института физиологии им. А.А.Богомольца НАН Украины Кабанченко С.И.
был сконструирован специальный прибор и написана управляющая программа. Данный
прибор представляет собой массивную круглую алюминеевую плиту диаметром 20 см с
электронагревателем и термочувствительными элементами, которые через цифровой
интерфейс подключены к комьютеру с установленной управляющей программой.
Компьютер, основываясь на показаниях термодатчиков, управляет нагревом плиты
так, чтобы поддерживать в каждой точке на ее поверхности заданную оператором
температуру с точностью до 0.1 °С. По периметру плиты смонтирован
воздухопроницаемый пластиковый бортик высотой 30 см. После того, как
экспериментальное животное помещалось на поверхность с фиксированной
температурой, начинался отсчет времени до наступления характерной болевой
реакции – лизания одной из задних конечностей. Показания таймера сохранялись на
компьютере при помощи программы, созданной инженером Института физиологии им.
А.А.Богомольца НАН Украины Хомулой Е. В. Последующая статистическая обработка
данных производилась при помощи процессора электроных таблиц Microsoft Excel.
2.3.3.Метод «формалиновый тест»
При исследованиях поведенческих реакций животных при острой боли нами
применяется метод "формалиновый тест". В этих экспериментах наблюдаемое
животное подвергается воздействию ноцицептивного стимула, вызываемого подкожным
введением 20 мкл 5% раствора формалина в заднюю лапу, после чего в течение
полутора часов ведется наблюдение поведенческих реакций (таких как перемещение,
потребление пищи и воды, лизание поврежденной конечности, подергивания
поврежденной конечности, сон). Регистрация наблюдаемых реакций осуществляется
при помощи компьютера. Программа, необходимая для мгновенной регистрации и
первичной обработки результатов была написана инженером отдела ОФНС института
физиологии им. А.А.Богомольца Хомулой Е. В. Последующая обработка результатов и
их статистический анализ производились при помощи программ Microsoft Excel и
Origin.
Все экспериментальные животные подвергались наблюдению в одинаковых
лабораторных условиях, при которых влияние оператора на реакции животных было
сведено к минимуму.
Получение и подготовка препарата к эксперименту
2.4.1. Получени