Разработка антигенного эритроцитарного диагностикума для иммунологического мониторинга сальмонеллеза крупного рогатого скота

ОГЛАВЛЕНИЕ
1 ВВЕДЕНИЕ......................................................3
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ..............................................6
2.1. Краткая характеристика возбудителя сальмонеллеза........6
2.1.1. Антигенная структура сальмонелл.......................7
2.2. Роль сальмонелл в патологии животных...................13
2.3. Современные лабораторные методы
диагностики сальмонеллёза...................................19
2.3.1 .Реакция непрямой гемагглютинации (РИГА)
для диагностики сальмонеллеза.............................28
2.4. Методы приготовления эритроцитарных
диагности кумов.............................................34
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.................................... 44
3.1. Материалы и методы.....................................44
3.2. Резул ьтаты исследован и й.............................57
3.2.1. Клинико-эпизоотологические данные....................57
3.2.2. Выделение и идентификация культур сальмонелл.........57
3.2.3. Отработка режимов приготовления эритроцигарного антигенного сальмонеллезного диагностикума............. 60
3.2.4. Результаты экспериментальных исследований
по получению гипериммунных сальмонеллезных сывороток........65
3.2.5. Результаты экспериментальных испытаний эритроцитарного диагностикума в PH Г А на материале
от вакцинированных и больных животных.......................72
3.2.6. Результаты сравнительного изучения РНГА и РА.........79
3.2.6.1. Результаты сравнительного изучения РНГА
макро- и микрометодом.......................................79
3.2.6.2. Результаты сравнительного изучения РНГА макрометодом и РА........................................81
4 ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ............................83
5. ВЫВОДЫ......................................................89
6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.....................................90
7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ............................91
8 ПРИЛОЖЕНИЕ..................................................112
3
1. ВВЕДЕНИЕ
1.1. Актуальность темы. В условиях рыночной экономики важное значение имеет качество биопрепаратов, предлагаемых ветеринарным специалистам, используемых с профилактической целью, а именно их иммуногенность и длительность иммунного ответа.
Разработка диагностических тестов для мониторинга иммунного фона у животных дает возможность ветеринарным врачам своевременно
организовать профилактические мероприятия, а специалистам
лабораторий проводить экспресс-диагностику инфекций и оценивать качество опытных и производственных серий вакцинных препаратов.
Постоянное изучение этиологической структуры желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных в различных регионах страны является вопросом первостепенной важности, определяющим эффективность серологической диагностики и
специфической профилактики этих инфекций.
Разработка новых диагностических тестов достаточно чувствительных и простых в исполнении и стандартизированных для проведения эпизоотологического обследования, иммунологического
мониторинга и изучения эффективности специфических мероприятий против сальмонеллеза является весьма актуальной задачей, так как до настоящего времени на практике применяется реакция агглютинации, которая является недостаточно чувствительной и специфичной.
В этой связи представляется актуальным разработка более специфического и чувствительного метода, каковым является реакция непрямой гемагглютинации (РЫТА). Использование антигенного эритроцитарного диагностикума позволит проводить серологическую диагностику сальмонеллеза, а также проводить оценку иммунного ответа на фоне применяемых ассоциированных и моновалентных вакцин против
11
симметричным пиком. Белок жгутика по данным Б.Ф. Логлазова (1977), может существовать в двух конфшурациях (а и (3). Они способны переходить одна в другую и этот переход обеспечивает функционирование жгутиков как двигательного аппарата. Имеются данные, что флагеллин Б. ТурБтшгшт содержит уникальную аминокислоту' Ь-Ы-метил-1 -лизин, которая была ранее обнаружена в актине мышц, и возможно, играет определенную роль в проявлении сократительной функции жгутика (УюИегу Н., 1972; 1сЫ1а А., РапсЬ С., 1972; Карпухин Г.И. и др., 1979; Нй^езЛ., 1987).
Н-антигены сальмонелл термолабильны, разрушаются при температуре 75-100 °С, нетоксичны для лабораторных животных.
По данным Г.И. Карпухина и др. (1979) различие в специфичности Н-антигенов у разных серотипов сальмонелл зависит от определенных отклонений в аминокислотном составе флагеллина жгутиков, их относительного содержания. Однако, у отдельных серотипов сальмонелл аминокислотный состав флагеллина достаточно постоянен. Авторами показано, что нет различий в аминокислотном составе флагеллинов, содержащих Н-антигены первой или второй фазы. Эти данные позволяют предположить, что серологическая специфичность Н-антигеиов зависит не только от их аминокислотного состава, но и от первичной структуры этого белка (Поглазов Б.Ф., 1977; Карпухин Г.И. и др., 1979; Лак Г.С. и др.,
1988).
Некоторые серогипы сальмонелл не обладают Н-антигенами (Б. gallinaruш, 8. риНогит).
О- и Н-антигены вызывают образование различных антител, отличающихся по характеру агглютината. О-агглютинация мелкозернистая, клетки соединяются полярными поверхностями, образуя мелкие агрегаты. Н-агглюти нация характеризуется образованием
12
хлопьевидного рыхлого агглютината, клетки соединяются своими жгутиками, происходи! их обездвиживание. Жгутики играют роль приближения бактерий к клетке хозяина и адгезии (Б.А. Матвиенко, 1986).
У ряда сероваров сальмонелл доказано наличие поверхностного К-антигена. Он обладает превентивными свойствами, стимулирует синтез специфических антител в высоких титрах. По химической природе К-антигены представляют собой бслково-полисахаридный комплекс. К-антигены участвуют в адгезии, подавляют фагоцитоз, обеспечивают выживание и размножение сальмонелл внутри фагоцитов, сообщают устойчивость к переваривающей активности фаголизосом, а также резистентность к бактерицидному действию нормальной сыворотки крови (Степанова Л.К., 1980). К К-антигенам относится Vi-антиген (S. typhi, S. paratyphi С), расположенный более поверхностно чем О-антиген (в микрокапсуле. Vi-антиген, или антиген вирулентности, - соматический антиген, принадлежащий к группе поверхностных, или капсульных (К-) антигенов. Он термолабилен, разрушается при кипячении в течение 10 минут, частично инактивируется под действием фенола и при температуре 60 °С в течение 1 часа.
Он представляет собой полимер N-ацегилированной аминогексуровой кислоты, обладает выраженной иммуногенностью и протективными свойствами, в связи с чем применяется в качестве «диагностикума» в различных иммунологических реакций (Смирнов В.В. и др., 1980).
Антигенная структура сальмонелл также как и другие биологические свойства, подвержена изменению (Килесо В.А., Болотовский В.М., 1973; Блюгер А.Ф. и др., 1975; Покровский В.И., 1999). Под влиянием различных факторов внешней среды может наблюдаться постоянная или временная утрата или в разной степени выраженное изменение соматического или