2
СОДЕРЖАНИЕ
ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ........................................... 4
ВВЕДЕНИЕ................................................................ 5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ..................................................... 11
1.1. Возбудитель сальмонеллеза.......................................... 11
1.1.1. История открытия возбудителя и его таксономическое ^
положение.............................................................
1.1.2. Морфология возбудителя и типкториальные свойства................ 12
1.1.3. Биохимические свойства.......................................... 13
1.1.4. Антигенная структура сальмонелл................................. 14
1.1.5. Эпизоотология сальмонеллеза и клинические признаки
заболевания...........................................................
1.1.6. Иммунитет и специфическая профилактика.......................... 21
1.2. Методы диагностики сальмонеллеза................................... 24
1.2.1. Бактериологический анализ........................................ 24
1.2.2. Серологические методы............................................ 26
1.3. Иммунофсрмситный анализ............................................ 29
1.3.1. Сущность, принципы, практическое применение...................... 29
1.3.2. Применение ИФА для обнаружения антител к ^ сальмонеллам..............................................................
1.4. Заключение по обзору литературы.................................... 34
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ............................................. 35
2.1. Материалы.......................................................... 35
2.1.1. Штаммы........................................................... 35
2.1.2. Питательные среды................................................ 35
2.1.3. Животные......................................................... 36
2.1.4. Антигены......................................................... 36
2.1.5. Сыворотки........................................................ 36
2.1.6. Растворы и реактивы.............................................. 37
2.2. Методы............................................................. 38
'л ' '
2.2.1. Культивирование бактерий......................................... 39
2.2.2. Получение бактериальных антигенов................................ 39
2.2.3. Определение активности сывороток в количественной РА............. 41
2.2.4. Постановка непрямого твердофазного варианта ИФА для выявления
антител к бактериям рода Salmonella.................................. 42
2.2.5. Получение нормальных сывороток крови свиней и кур............. 43
2.2.6. Статистическая обработка результатов.......................... 43
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ............................... 44
3.1. Получение специфических сывороток крови......................... 44
3.2. Изучение активности и специфичности препаратов различных антигенов S. Typhimurium, .S'. Enteriticlis и S. Clioleraesuis в ИФА. 48
3.3. Разработка иммунофсрмситных тест-систем на основе липополисахаридпых антигенов для определения антител к некоторым серовариаитам Salmonella....................................... 52
3.3.1. Определение оптимальных разведений антигена................... 52
3.3.2. Оптимизация условий постановки непрямого варианта ИФА......... 54
3.3.3. Получение комбинированных липополисахаридпых антигенов........ 59
3.4. Разработка иммунофсрмситных тест-систем для определения антител
к бактериям рода Salmonella при тестировании сывороток крови кур и
Г i9 * '•
свиней в одном разведении............................................ 63
3.4.1. Определение титра антител к антигенам Salmonella в сыворотках крови кур и свиней......................................................... 64
3.4.2. Определение позитивно-негативного порога...................... 68
3.4.3. Выбор допустимых значений ОГ1 контрольных сывороток........ 71
3.5. Сравнение чувствительности и специфичности разработанных иммунофсрмситных тест-систем с коммерческими наборами ИФА и
РА................................................................... 72
3.6. Проведение серологических исследований евино- и птнцепоголовья для выявления специфических антител к сальмонеллам с применением разработанных иммунофсрмситных тест-снсгсм..................... 77
4. ОБСУЖДЕНИЕ РУЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ
ИССЛЕДОВАНИЙ......................................................... 79
5. ВЫВОДЫ............................................................ 87
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.......................................... 89
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ................................................... 91
ПРИЛОЖЕНИЯ......................................................... 109
11
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 123 страницах, иллюстрирована 24 таблицами и 18 рисунками. Список использованной литературы включает 184 источника, из которых 123 иностранных.
Личный вклад
Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы работы проводились совместно с сотрудниками лаборатории диагностики бактериальных инфекций и лаборатории гриппа и эпизоотологии болезней птиц, за что автор выражает им искреннюю благодарность.
Диссертационная работа выполнена в ФГУ «ВНИИЗЖ» в 2007-2009 гг.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Возбудитель сальмонеллеза
Сальмонеллез - инфекционное заболевание людей и животных, вызываемое грамотрицательными бактериями рода Salmonella, характеризующееся различными клиническими проявлениями [6, 9, 14, 95, 126, 144, 151]. Возбудитель сальмонеллеза может вызывать, как первичные инфекции (брюшной тиф человека, сальмонеллезы молодняка животных, аборты у овец и кобыл, пуллороз птиц и др.), так и вторичные, осложняющие бактериальные и вирусные болезни (пневмонии у молодняка, чуму у свиней и др.) [13, 19, 21, 35, 71, 77]. У людей он также вызывает пищевые токсикоинфекции при употреблении инфицированных продуктов животного происхождения. У живо тных весьма распространены латентные инфекции -сальмопеллопосительство [17, 33, 37, 130].
1.1.1. История открытия возбудителя и его таксономическое положение
Родовое название Salmonella было дано этим бактериям Lignieres J. в 1900 г. в честь американского исследователя Salmona D., описавшего в 1885 т. • микроорганизм, известный теперь как Salmonella Choleraesuis, и считавшийся первоначально возбудителем чумы свиней [19].
V
12
Первым, кто обосновал бактериальную этиологию сальмонеллезов, был Gartner A., выделивший в 1888 г. во время вспышки энтеритов во Франкенхаузене из мяса вынужденно убитой коровы и селезенки умершего человека идентичные бактерии, названные им «Bacillus enter it idis» и именуемые теперь Salmonella Enteritidis [ 163].
Первое сообщение о другом очень распространенном в настоящее время сероварианте бактерий рода Salmonella - S. Typhi murium, было сделано в 1892 г. Löffler F., выделившим этот микроорганизм от павших белых мышей во время эпизоотии в питомнике Грейсвальского университета [19].
Rettger А. в 1899 г. впервые описал S. Pullorum - возбудитель пуллороза птиц, нанесший значительный экономический ущерб птицеводству многих стран [1,9, 131].
С ‘каждым годом число выявленных представителей рода Salmonella увеличивалось. Особенно быстро оно нарастало после второй мировой войны и в настоящее время приближается к 2500 [19, 29, 43].
По современной классификации род Salmonella включает 2 вида:
S. enterica и S. bongori. Наиболее важное значение в инфекционной патологии сельскохозяйственных животных принадлежит виду S. enterica, который, в свою очередь, делится на 6 подвидов: S. enterica subspecies enterica, S. enterica subspecies salamae, S. enterica subspecies arizonae,
S. enterica subspecies diarizonae, S. enterica subspecies houtenae, S. enterica subspecies indica. По схеме Кауфмана-Уайта все сальмонеллы разделены на сероварианты по соматическим (О-АГ) и жгутиковым (И-АГ) антигенам [19, 136, 146, 155, 156].
1.1.2. Морфологии возбудителя и пшкториальные свойства
Сальмонеллы — мелкие' палочковидные бактерии с закругленными концами'от 1 до 3 ммк длиной и 0,5-0,8 ммк шириной, грамотрицательные неспорогенные факультативные анаэробы, как правило, подвижные благодаря иеритрихиально расположенным жгутикам, хорошо
- Київ+380960830922