СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
А.к. - аминокислота;
АМС - альвеолярные макрофаги свиней;
АБТС - 2,2-азино-ди-(-3-этилбензтиазолинсульфонат);
БСА - бычий сывороточный альбумин;
ДСН - додецилсульфат натрия;
ВНИИЗЖ - Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных;
ВНИИВВиМ - Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии;
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;
ДПИ - дни после инокуляции;
ИПМА - иммунопероксидазный монослойный анализ;
ИФА - иммуноферментный анализ;
КК - культура клеток;
МА -104 - перевиваемая культура клеток почки зеленой мартышки;
МАИС - 145- перевиваемая культура, клон МА-104;
Мат - моноклональные антитела;
НРИФ - непрямая реакция иммунофлуоресценции; гИС - рекомбинантный нуклеокапсидный белок;
ОП - оптическая плотность;
ОРС - открытая рамка считывания;
ОТ-ПЦР - обратная транскрипция и полимеразная цепная реакция;
ПНП - позитивно-негативный порог;
ПЦР - полимеразная цепная реакция;
PH - реакция нейтрализации;
РНК - рибонуклеиновая кислота;
РРСС - репродуктивно-респираторный синдром свиней;
ЫРИА-ИФА - иммуноферментный анализ, поставленный с использованием коммерческого набора С1\ЛГЕ5Т1т ЖРЯА;
ЮЕХХ-ИФА- иммуноферментный анализ, поставленный с использованием коммерческого набора НегбСИек РРЯЭ ЮЕХХ.
2
ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр.
1.ВВЕДЕНИЕ..................................................... 5
2.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ............................................... 10
2.1. Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней 10
2.1.1.Классификация вируса РРСС.................................. 10
2.1.2.0рганизация генома вируса РРСС, структурные и
неструктурные белки....................................... 11
2.1.3.Вариабельность вируса РРСС................................. 14
2.2. Особенности иммунитета при РРСС............................. 18
2.2.1.Клеточный иммунитет........................................ 18
2.2.2.Гуморальный иммунитет...................................... 19
• 2.3. Диагностика заболевания РРСС.............................. 23
2.3.1.Обнаружение антигена вируса РРСС........................... 24
2.3.2.Обнаружение антител, специфичных к вирусу РРСС............. 25
2.4. Критерии для стандартизации методов исследования в применении к диагностическим тестам по обнаружению антител.......................................................... 28
2.5. Заключение по обзору литературы............................. 31
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ...................................... 33
3.1.Материал ы................................................... 33
3.1.1.Вирус и вируссодержащие материалы......................... 33
3.1.2.Культуры клеток........................................... 33
3.1.3.Рекомбинантный антиген вируса РРСС........................ 34
3.1.4.Сыворотк и................................................ 34
3.1.5.Моноклональные антитела................................... 34
3.1.6.Растворы и реактивы, использованные в работе.............. 35
3.1.7.0борудование.............................................. 37
3.2.Методы исследования......................................... 37
3.2.1. Иммуноферментный анализ.................................. 37
3.2.2. Прямой сэндвич-вариант ИФА............................... 37
В.Ф. Ковалишину, С.А. Кукушкину, глав.техн. О.Г. Андреевой, А.Б. Смирнову, Ю.В. Зинковскому, - за практическую помощь в выполнении отдельных этапов работы и оформлении диссертации.
Особую благодарность автор выражает доктору Р.СогсПоН (Институт зоопрофилактики г. Брешия (Италия)) за любезно предоставленные моноклональные антитела 408 и 405.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
Вирус РРСС является причиной расстройств репродуктивной функции у свиноматок и респираторных заболеваний у поросят (8,85,114). Репродуктивно-респираторный синдром вперзые описан как “таинственная болезнь свиней" в США в 1987г (62). Вирус первоначально был выделен в 1991г. в Центральном ветеринарном институте (Нидерланды) (125), в 1992 г. его выделили в США (37,23).
2.1.1. Классификация вируса РРСС и его строение
Вирус РРСС относится к семейству АЦегмпбае, рода АЛегмгиз, порядка Мбоука^э. Семейство А|1егмпбае включает в себя также вирус, повышающий уровень лактатдегидрогеназы, вирус артериита лошадей и вирус геморрагической лихорадки обезьян (27,114). По размеру и структуре вириона, полярности РНК генома вирусы семейства Аг1егмпбае напоминают представителей семейства Тодау1пбае (104). Они имеют сходную геномную организацию и общую стратегию репликации с коронавирусами, но величина их генома много меньше (12-15 кОа), чем у коронавирусов. Кроме того, они имеют различные морфологические и физико-химические свойства (39, 90).
По данным электронной микроскопии вирус РРСС является мелким сферическим оболочечным вирусом размером 45-80 нм (23,100). По данным других авторов (22) этот вирус несколько больше и составляет в диаметре 50-100 нм. Вирион состоит из кубического нуклеокапсида
1)
диаметром 23-35 нм и липопротеидной оболочки (23,100). По данным Оеа
в. с соавторами и МагбавБ!' Н. с соавторами величина вирусной частицы составляет в диаметре 50-72 нм, величина нуклеокапсида - 20-30 нм (42,71). На поверхности нуклеокапсида имеются выступы длиной 12-15 нм. В состав оболочки вириона входят липиды и углеводы как часть гликопротеинов (5,6,9,42,93,94).
Схематическое изображение частицы вируса РРСС показано на рисунке 1.
♦
*
Рисунок 1. Схематическое изображение вируса РРСС
М-нуклеокапсидный белок;
М-мембранный белок;
СР2,СРЗ,СР4,СР5-структурные белки оболочки.
2.1.2. Организация генома вируса РРСС, структурные и неструктурные
белки
*
Г еном вируса РРСС представлен одноцепочечной линейной положительной РНК с молекулярной массой приблизительно 15 кйа и
- Київ+380960830922