2
СОДЕРЖАНИЕ
стр.
ВВЕДЕНИЕ............................................................ 4
1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................ 9
1.1. Общая характеристика возбудителя B.canis...................... 9
1.2. Распространение бруцеллеза собак, вызываемого B.canis........ 11
1.3. Клинические признаки заболевания и пути распространения...... 14
1 .4. Серологическая диагностика бруцеллеза животных.............. 18
1.4.1. Реакция агглютинации пробирочная........................... 18
1.4.2. Реакция агглютинации пластинчатая.......................... 22
1.4.3. Реакция связывания комплемента............................. 23
1.4.4. Реакция непрямой или пассивной гемагглютинации............. 27
1.4.5. Реакция иммунофлюоресценции................................ 30
1.5. Бактериологическая диагностика бруцеллеза собак.............. 32
1.6. Заключение к обзору литературы............................... 34
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ....................................... 36
2.1. Материалы и методы........................................... 36
2.2. Биологические свойства культур B.canis, выделенных
на территории Западной Сибири................................. 39
2.2.1. Культурально-морфологические свойства...................... 39
2.2.2. Агглютинабельные свойства.................................. 44
2.3. Изучение диагностической ценности РА и РСК
при бруцеллезе собак.......................................... 47
2.3.1. Проверка специфичности антигенов для РА и РСК................ 47
2.3.2. Изучение чувствительности диагностикумов
в опыте на белых мышах...................................... 48
2.3.3. Изучение чувствительности диагностикумов
в опыте на морских свинках.................................. 51
3
2.3.4.Опыт на собаках........................................... 54
2.3.5. Изучение чувствительности РА и РСК при бруцеллезе собак в производственных условиях.................................. 58
2.3.6. Определение классов иммуноглобулинов у животных, экспериментально зараженных В.сашэ................................ 59
2.4. Разработка диагностикума для РИГА.......................... 63
2.4.1. Сравнительная оценка активности, специфичности, чувствительности эритроцитарных диагностикумов, полученных разными методами из В.сать.............................................. 63
2.4.2. Испытание активности, специфичности и чувствительности эритроцитарных диагностикумов.................................. 67
2.5. Изучение диагностической эффективности РИФ с Я-бруцеллезными люминесцирующими иммуноглобулинами в экспериментальных и производственных условиях.................................. 75
2.5.1. Изучение специфичности и чувствительности РИФ............ 75
2.6. Изучение чувствительности и целесообразности применения биологического исследования при бруцеллезе собак................ 82
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.......................... 86
4. ВЫВОДЫ....................................................... 99
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.................................... 101
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.............................................. 102
ПРИЛОЖЕНИЕ..................................................... 125
11
рым анилиновым красителям (фуксину при концентрации 1:25000, сафранину 1:5000). Образцы штаммов B.canis RM 6/66 и Мех 51 после 7-10 пассажей в лабораторных условиях и длительного хранения сохраняли стабильность основных биологических свойств.
Исследования, проведенные ВГНКИ (К.В. Шумилов, 1984; Ю.П. Михайлова, 2000), свидетельствуют о циркуляции на территории РФ как первого, так и второго биовара B.canis, последний отличается от референтного штамма B.canis RM 6/66 по ростовым свойствам на средах с антибиотиками и анилиновыми красителями. Изолированные ими культуры на территории г. Москвы и г. Волгограда авторы относят ко второму биовару B.canis - МЕХ 51, а в г. Санкт-Петербурге - и первого, и второго.
В.Г. Ощепковым, И.О. Кривошеевым (2001) установлено, что изолированные на территории Западной Сибири (г. Омск) эпизоотические штаммы B.canis способны под воздействием антибиотиков (доксициклина, стрептомицина, пенициллина) к трансформации in vivo и in vitro в нетипичные бруцеллезные клетки - L-форму. Важно отметить, что трансформированные L-формы бруцелл, обладающие низкой вирулентностью, способны реверсировать в обычные бактериальные формы, что подтверждено Т.А. Толмачевой (1975), В.Г. Ощепковым, JI. Н. Гордиенко (2000) в опытах in vivo и in vitro.
1.2. Распространение бруцеллеза собак, вызываемою B.canis
В последние десятилетия бруцеллез собак, вызываемый B.canis, был зарегистрирован на разных континентах: Южной Америке (E.J. Villalba, 1992), Европе (Е.М. Mateu de Antonio, 1998), Азии (C. Yamauchi, 1974), Австралии (N.E. Medveczky, R. Crichton, 1986), Африке (I.О. Maurice, 1989). Кроме того, многие авторы из разных стран констатируют обнаружение бруцеллезной инфекции, вызываемой видом canis: в Англии (D.J.Taylor, 1980), Греции (K.Sarris, 1987), Канаде (R. Higgins, 1979), Аргентине (D.M. Myers, 1980),
12
Японии (Т. Sericawa, Т. Muraguchi, 1979; C.A. Jonson, 1982), Китае (D.Q.Shang, 1984), Новой Зеландии (W.D. Hines, В.A. Freeman, 1964), Германии (A.Weber, 1980), Испании (E.J. Villalba, 1992), Италии (C. Valente, 1991), Индии (V.KSrinivasan, 1992), Чехословакии (Z. Scbek, 1976; I. Sycora, 1977), Новой Гвинее (B.E. Patten, 1987).
О распространении инфекции среди собак, вызываемой B.canis, в пределах 2-14% от обследованных животных свидетельствуют многие зарубежные исследователи (G.L. Hoff, J.B. Nichols, 1974; V.K. Srivansan, 1992; M.Martin et al., 1992; E.M. Mateu di Antonio, M. Martin, 1995; M. Necsulescu ct al., 1995).
Бруцеллез собак, обусловленный B.canis, за рубежом широко распространен в питомниках и среди бездомных собак (J.M. Buck, 1930; L.E. Carmichael, 1968; L.E. Ferdrickson, C.E Barton, 1974; S.P. Galphin, 1977; J. Brown et al., 1976; G.S. Lovejoy, 1976; J.A. Moore, G.N. Gupta, 1968).
Ученые отмечают, что среди небольших групп бездомных собак наиболее часто заболевают кобели (Т. Serikawa, Т. Muraguchi, 1978, 1979), в то время как в больших колониях собак проявление инфекции приблизительно одинаково среди представителей обоих полов (J.A. Moore, T.J. Kakuk, 1969).
Проведенные американскими учеными исследования за период 1967-77гг. в городах Пешвилл, Мемфис, Атланта указывают о широком распространении бруцеллезной инфекции, вызываемой B.canis, среди собак, находящихся в черте города (L.E. Fredricson, C.E. Barton, 1974; G.S. Lovejoy et al., 1976).
Распространение бруцеллеза собак в черте города Детройта (США), по данным A.B. Thirmann (1980), следующее: из 499 исследованных проб сыворотки крови собак в РА имели титры 1:50 - 33 (6,6%), 1:100 - 14 (2,8%) и 1:200 ~ 43 (8,6%). В пригороде 5,7% животных имели титры в РА - 1:200.
Исследователи за рубежом отмечают разный уровень инфицированно-сти собак бруцеллезной инфекцией в черте города и сельской местности. Так,
- Київ+380960830922