РОЗДІЛ 2
НАПРЯМКИ, МАТЕРІАЛ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ
З метою вивчення етіології і патогенезу дисплазій суглобів кінцівок у собак,
удосконалення їх діагностики, лікування й профілактики клінічні та
експериментальні дослідження виконували за кількома напрямками (табл.2.1,
табл.2.2).
Таблиця 2.1
Напрямки досліджень
ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНІ
КЛІНІЧНІ
Вивчення морфофункціональних
особливостей метафізарного хряща
на різних етапах постнатального
розвитку
Визначення клінічних форм дисплазій суглобів кінцівок,
дослідження їх симптоматики,
етіології й патогенезу
Вивчення регенерації суглобового
хряща
2. Розробка методики клінічного
обстеження собак із метою
діагностики дисплазій суглобів
Дослідження змін у структурі та
мукополісахаридному складі
метафізарного й суглобового
хрящів при остеохондропатіях
3. Апробація методів лікування при
дисплазіях окремих суглобів
кінцівок
Розробка методу пункційної біопсії суглобового хряща
4. Попередження дисплазій,
спричинених переломами кісток у
ділянках метафізарних хрящів
Вивчення морфофункціональних особливостей метафізарного хряща на різних етапах
постнатального розвитку (до 1 місяця, 5-6 та 9-11 місяців) вивчали на 10 трупах
собак, які загинули з різних причин і не мали ознак дисплазій суглобів. За
об’єкт дослідження обрали дистальний метафізарний хрящ променевої кістки.
Таблиця 2.2
Дані про загальний обсяг проведених досліджень
Методи досліджень
Кількість собак (за роками)
2000
2001
2002
2003
2004
Разом
Клінічні дослідження
Усього обстежено
242
274
229
226
190
1161
Виявлено дисплазій
суглобів (%)
32
(13,2)
49
(17,9)
23
(10,0)
31
(13,7)
16
(8,4)
151
(13,0)
Виявлено переломів у ділянках метафізарних хрящів (%)
(2,8)
11
(4,0)
12
(5,2)
14
(6,1)
12
(6,3)
56
(4,8)
Експериментальні дослідження
Регенерації суглобового хряща
21
Змін метафізарного хряща у постнатальному розвитку
10
Змін у метафізарному хрящі при остеохондропатії
Змін у суглобовому хрящі
при остеохондропатії
(із них за допомогою
методу пункційної біопсії)
(3)
(2)
(4)
(1)
(2)
15
(12)
Загальна кількість собак в експериментальних дослідженнях
51
Разом
1212
Зміни у метафізарному хрящі при дисплазіях вивчали на 5 трупах собак, що
загинули з різних причин і у яких були виявлені деформації зап’ясткового та
колінного суглобів. Зміни у суглобовому хрящі при дисплазіях досліджували на 3
трупах собак та у 12 випадках проведення пункційної біопсії останнього у собак,
що мали симптоми розсікаючого остеохондриту плечового суглоба (табл.2.2, 2.3).
Таблиця 2.3
Дані про собак, у яких досліджували гістологічними та гістохімічними
методами метафізарний та суглобовий хрящі
Об’єкт дослідження
Вік
(міс.)
Кіль-
кість
Породи
Дистальний метафізарний хрящ променевої кістки (норма)
до 1
безпородні 2,
колі 1
5-6
безпородні 3, нім.вівч.1
9-11
безпородні 2,
лайка 1
Дистальний метафізарний хрящ
ліктьової кістки (деформація зап’ясткового суглоба)
6-7
колі 1,
такса 1,
бассет 1
Дистальний метафізарний хрящ
стегнової кістки (деформація
колінного суглоба)
7-8
кавказька
вівчарка 1,
колі 1
Суглобовий хрящ проксимального
епіфіза плечової кістки
(розсікаючий остеохондрит)
5-10
15
нім. вівч. 5,
ротвейлери 3, кавк. вівч. 4,
колі 3
Разом
30
Для гістологічних досліджень ділянки суглобового або метафізарного хрящів разом
із кістковою тканиною вилучали та фіксували у формаліні або спирті,
декальцинували у електроліті, після чого різали на мікротомі, що заморожує, або
готували парафінові зрізи. Під час досліджень біоптатів суглобового хряща
декальцинацію не проводили. Їх після фіксації різали, зазвичай, на мікротомі,
що заморожує.
При гістологічних дослідженнях зрізи фарбували гематоксиліном Караці та еозином
за загально прийнятою методикою. Гістохімічними методами досліджували різні
фракції білково-вуглеводних полімерів (мукополісахаридів). Глікопротеїди (ГП)
та глікоген визначали ШИК-реакцією. Глікоген ідентифікували попередньою
обробкою зрізів амілазою слини. Сульфатовані глікозамінглікани (ГАГ) виявляли
альциановим синім при рН 0,2, несульфатовані ГАГ та сіалові кислоти при рН 2,7.
Для контролю гістохімічних реакцій та ідентифікації мукополісахаридів
виконували блокаду альдегідних груп, ацетилювання (блокаду 1,2-глікольних
груп), обробку зрізів тестикулярною гіалуронідазою, жорстке та м’яке
метилювання та деметилювання зрізів.
Гістологічні препарати вивчали за допомогою мікроскопів МБС-1, МБИ-3, МБИ-6.
Мікрофотографії отримували, використовуючи пластинчасту камеру 9х12 на
мікроскопі МБИ-6 та такого ж розміру чорно-білі фотоплівки. Діаметр
хондроцитів, товщину зон метафізарного хряща визначали за допомогою окулярного
мікрометра за загально прийнятою методикою. Підрахунок кількості клітин в
окремих зонах хряща виконували під час проектування гістологічних препаратів
мікроскопом МБИ-6 на матове скло, на якому наносили квадрат, що відповідав 0,01
кв. мм їх площі.
Клінічні дослідження проводили на собаках, що надходили протягом 2000-2004
років на амбулаторний прийом у ряд клінік м. Києва:
навчально-науково-виробничну клініку ветеринарної медицини Національного
аграрного університету, Київську міську державну клініку ветеринарної медицини,
приватні клініки ветеринарної медицини “Добродій” і “Медісан” та ветеринарну
клініку при державному підприємстві “Укрветпромпостач” (табл.2.4).
Таблиця 2.4
Кількість обстежених собак та випадків дисплазій суглобів
ННВ клініка
ветери-нарної медицини
НАУ
Київська
місь
- Київ+380960830922