2
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИИ 5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 10
1.1. Характеристика возбудителя хламидиоза 10
1.2. Устойчивость к физико-химическим факторам и антимикробным веществам 15
1.2.1. Химический состав 17
1.2.2. Антигенная структура 18
1.3. Репродукция хламидмй в культурах клеток, на куриных эмбрионах и
лабораторных животных 21
1.3.1. Индикация и идентификация антигенов
хламидий в патологическом материале 25
1.3.2. Серологические реакции 27
1.4. Тест-система ИФА при диагностике
инфекционных болезней животных 31
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 45
2.1. Материалы и методы 45
2.1.1. Изоляты хламидий 45
2.1.2. Сыворотки и патологический материал 45
2.1.3. Подопытные животные и куриные эмбрионы 46
2.1.4. Выделение и идентификация возбудителей 46
2.1.5. Изучение биологических свойств изолированных микроорганизмов 48
2.1.5.1. Патогенность 48
2.1.5.2. Антигенные свойства 49
2.1.6. Серологические свойства 49
2.1.7. Статистическая обработка результатов исследований 50
3
2.2. Результаты собственных исследований 50
2.2.1. Выделение возбудителей хламидиоза от клеточных
и домашних плотоядных на куриных эмбрионах 50
2.2.2. Биологические свойства изолятов хламидий 53
2.2.2.1. Изучение морфологии хламидий 53
2.2.2.2. Патогенность изучаемых изолятов хламидий
для куриных эмбрионов и лабораторных животных 55
2.2.2.3. Антигенные свойства возбудителей хламидийных инфекций пушных зверей (лисица, норка и песец)
и крупного рогатого скота 60
2.2.3. Разработка иммуноферментной тест-системы для
диагностики хламидиоза пушных зверей 61
2.2.3.1. Проведение исследований по получению мажорного
белка наружной мембраны хламидий 61
2.2.4. Получение иммунных антнхламидннных, специфических антител и анти-^О пушных зверей
(лисица, норка и песец) 64
2.2.4.1. Изучение динамики уровня хламидийных антител в
сыворотках крови пушных зверей, иммунизированных вакциной при получении сывороток 64
2.2.5. Выделение иммуноглобулинов класса в из сыворотки
лисиц, норок и песцов 64
2.2.6.Получение анти-^С лисиц, норок и песцов из гипериммунной сыворотки 72
2.2.7. Выделение антивидовых иммуноглобулинов (анти-^О лисиц, норок и песцов) 75
2.2.8. Мочение антивидовых иммуноглобулинов (анти-^С лисиц, норок
и песцов) ферментом пероксидазой 80
2.2.9. Тсст-система иммуноферментного аназиза для диагностики хламидиозов пушных зверей 87
14
В месте прикрепления элементарного тельца наблюдается инвагинация участка плазмолеммы, образование фагоцитарной вакуоли. Адсорбционная активность возбудителя определяется специфическими поверхностными термолабильными эффекторами, которые структурно связаны с типоспецифическими хламидийными антигенами и комплементарны клеточным рецепторам, содержащими сиаловую кислоту. Последняя подвергается разрушению нейраминидазой эффекторов, и "ворота клеточной стенки" отступают: хламидии проникают в клетку, подавляют ее важнейший защитный механизм, проявляя специфическую активность, направленную против слияния лизосом с фагоцитарной вакуолью. В начальной стадии инфицирования элементарное тельце становится ретикулярным. При этом в нем происходит ряд изменений: увеличивается количество рибосом и полирибосом, формируется типичный бактериальный нуклеоид, наблюдается увеличение бактериальной клетки и появляются формы бинарного деления. Все эти процессы протекают внутри вакуоли клетки - хозяина, где накапливаются ретикулярные тельца (105, 160).
Начальная фаза цикла развития продолжается 18-24 часа, после чего ретнк\лярные тельца (вегетативная форма) путем почкования или фрагментации материнской клетки реорганизуется в элементарные (спо-роподобиая форма), которые потом освобождаются из фагосом и инфицируют другие клетки мишени (8,105,438).
Процесс размножения хламидий начинается после проникновения элементарного тельца в клетку. По данным Friis (302) возбудитель стимулирует фагоцитоз. Вугпс, Moulder (223) подтверждают эти исследования; они обнаруживали способность хламидий активизировать ранее неактивные фагоциты. Проникновение элементарных телец в клетку-хозяина происходит путем эндоцитоза (248, 259, 283, 366). Проникнув в клетку, хламидии подавляют важнейший ее защитный механизм - слияние фагоцитарной вакуоли с лнзосомамн (264, 359, 367). Элементарные тельца реорганизуются в ретикулярные, которые путем почкования или фрагментации материнской
15
клетки распадаются на элементарные тельца, которые освобождаются из фагосом и инфицируют новые клетки - мишени (78, 188, 213, 259, 339). Цикл паразитирования длится 24 - 48 часов; возбудитель персистирует в фагосоме до тех пор. пока клетка-хозяин не разрушится (19, 100. 213, 259.438).
В период преобразования вегетативных форм хламидий в элементарные тельца клетка осуществляет выброс в кружаюшую среду гидролитических ферментов. В этот же период под воздействием токсических продуктов метаболизма микроорганизма прогрессируют дегенеративные изменения клетки. Ядро оттесняется к периферии клетки увеличивающимся цитоплазматическим включением (компактные или рыхлые зернистые массы морфологических структур возбудителя на разных этапах ею размножения) и деформируется (82,83, 160).
Выход инфекционного потомства составляет от 200 до 1000 на одно элементарное тельце. Для этого ретикулярное тельце должно поделиться от 8 до 10 раз, т.е. пройти 10 клеточных циклов во время одного цикла развития (115).
Хламидии не обладают собственными энергетическими системами и используют клетки хозяина, как поставщика метаболической энергии, проявляя энергозависимый паразитизм (115).
1.2. Устойчивость к физико- химическим факторам и а г пи м и к роб I г ы м вещества м
Хламидии обладают нестабильной инфекционноетыо. В то же время хламидии длительно сохраняются в обьектах внешней среды (61). Инкубация при температуре 37°С инактивирует инфекционную суспензию менее чем за 48 часов. При 56°С процесс инактивации проходит в течение нескольких минут. Даже при температуре 0°С происходит инактивация в течение несколько дней. Замораживание при минус 70°С сохраняет инфскционность
- Киев+380960830922