РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ
У відповідності з метою та поставленими задачами були проведені експериментальні дослідження контрольних та дослідних серій на 53 білих щурах обох статей лінії Wistar вагою 180-220 г віком 2-2,5 місяця та 20 безпорідних котах обох статей (переважно чоловічої) вагою 2-4,5 кг, а також здійснені дослідження у 25 практично здорових людей віком від 35 до 60 років, переважно чоловічої статі.
Під час проведення досліду щури утримувалися в загальноприйнятих умовах на стандартному раціоні харчування віварію згідно "Санитарным правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)" [142].
На білих щурах були проведені 5 серій експериментів: першу склала контрольна група - інтактні тварини, другу - тварини з гострим порушенням мозкового кровообігу справа, третю - тварини з гострим порушенням мозкового кровообігу зліва, четверту - тварини з хронічним порушенням мозкового кровообігу справа, п'яту - тварини з хронічним порушенням мозкового кровообігу зліва. На безпорідних котах проведено 2 групи досліджень: перша - інтактні тварини, друга - гостре порушення мозкового кровобігу зліва. У групі практично здорових людей здійснено вивчення показників системи згортання крові та фібринолізу у ліктьових венах.
Кров для дослідження у щурів забирали (в умовах гексеналового наркозу з розрахунку 100 мг на 1 кг маси тіла) шприцем із серця, у котів одночасно з яремних, а потім стегнових вен справа і зліва за допомогою сухого пластикового шприця (однакового об'єму та з однаковим діаметром голки). У людей кров забирали з ліктьової вени одночасно справа та зліва сухим пластиковим шприцем. Отриману кров негайно змішували з 3,8% розчином цитрату натрію у співвідношенні 9:1 та перемішували. В подальшому кров центрифугували протягом 10 хвилин при 1500 об/хв для отримання плазми насиченої тромбоцитами. Частину плазми піддавали повторному центрифугуванню протягом 30 хвилин при 3000 об/хв для осідання в ній тромбоцитів та отримання плазми ненасиченої тромбоцитами, а потім її використовували як субстрат для визначення впливу на неї гомогенатів тканин, еритроцитів та змиву з еритроцитів. Тканини забирали в умовах гексеналового наркозу у вигляді невеликих фрагментів стегнових м'язів та півкуль головного мозку тварин справа і зліва. В подальшому з цих фрагментів готували гомогенати у фізіологічному розчині хлориду натрію з розрахунку 1:100, які підлягали центрифугуванню при 1500 об/хв протягом 10 хвилин, а потім надосадову рідину використовували в експерименті. У роботі також використовували еритроцити та змив з еритроцитів - супернатант. Змив з еритроцитів одержували після відмивання у 0,9% розчині хлориду натрію цілих еритроцитів, які потім центрифугували протягом 10 хвилин при 1500 об/хв. Надосадову рідину використовували як супернатант.
У зв'язку з поставленими задачами в дослідженнях відтворювали різні патологічні стани. Зокрема, порушення мозкового кровообігу гострого та хронічного характеру з правої або лівої сторони. Експериментальна модель ішемії головного мозку в найбільшій мірі відповідає окклюзії сонної або середньої мозкової артерії, яка найчастіше зустрічається в клініці нервових хвороб. Модель гострої ішемії головного мозку у тварин викликали шляхом перев'язки сонної артерії справа або зліва на строк 15 хвилин під гексеналовим наркозом [10]. Хронічну ішемію головного мозку відтворювали шляхом неповної перев'язки загальної сонної артерії справа або зліва в умовах гексеналового наркозу на 7 днів (цей час був відведений для утворення у тварин хронічного порушення мозкового кровообігу) [135]. Після закінчення експериментів в обох випадках у тварин забирали кров та тканини органів (в умовах гексеналового наркозу), в яких визначали показники гемостазу та фібринолізу. У тканинах головного мозку визначали концентрацію вторинних продуктів перекисного окислення ліпідів (ПОЛ) (ТБК - активні продукти до і після 1,5 - годинної інкубації) та приріст малонового діальдегіду (МДА) за цей час, а також активність антиоксидантних ферментів: супероксиддисмутази (СОД) та каталази [43].
Розподіл експериментів за серіями наведено у табл. 2.1.
Таблиця 2.1
Розподілення експериментів та спостережень по серіям
№Назва серії дослідженняКількість
об'єктівСубстрат1Інтактні коти10Кров, плазма, еритроцити, тканини мозку, тканини стегнових м'язів2Гостре порушення мозкового кровообігу у котів10Кров, плазма, тканини півкуль головного мозку та стегнових м'язів3Інтактні щури10Кров, плазма, тканини півкуль головного мозку 4Гостре порушення мозкового кровообігу справа у щурів10Кров, плазма, тканини півкуль головного мозку 5Гостре порушення мозкового кровообігу зліва у щурів13Кров, плазма, тканини півкуль головного мозку
Продовження табл. 2.1
№Назва серії дослідженняКількість
об'єктівСубстрат6Хронічне порушення мозкового кровообігу справа у щурів10Кров, плазма, тканини півкуль головного мозку 7Хронічне порушення мозкового кровообігу зліва у щурів10Кров, плазма, тканини півкуль головного мозку 8Здорові люди25Кров, плазма
У роботі використані такі методи дослідження згортання крові та фібринолізу, як час рекальцифікації, тромбіновий час, протромбіновий час, активований частковий тромбопластиновий час, концентрація фібриногену, фібриноліз еуглобулінів [5]. Дослідження показників згортання крові та фібринолізу проводили за допомогою ручної методики з використанням реактивів фірм Hospitex Diagnostic (Італія), "Simko LTD" (Львів, Україна), "Ренам" (Москва, Росія).
Методи дослідження наведені у табл. 2.2.
Таблиця 2.2
Методи дослідження
№Назва методикиСубстратАвтори, рік видання1Час рекальцифікації плазмиПлазма, гомогенати півкуль головного мозку та м'язівBergerhof H.D.,
Roka L., 1954 [154]
Продовження табл. 2.2
№Назва методикиСубстратАвтори, рік видання2Тромбіновий часПлазма, гомогенати півкуль головного мозку та м'язівBiggs R.M.,
Macf
- Киев+380960830922