ГЛАВА 2
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОБСЛЕДОВАННЫХ БОЛЬНЫХ
2.1. Материалы и методы исследования
Исследования проведены в период 2001-2005 г.г. в нефрологическом отделении
городской детской клинической больницы №16 г. Харькова (главный врач - Харченко
Т.В.) на базе кафедры факультетской педиатрии Харьковского государственного
медицинского университета (зав. каф. проф., д.мед.н. Одинец Ю.В.), а также в
биохимическом отделе Центральной научно-исследовательской лаборатории (зав.
проф., Щербань Н.Г.) Харьковского государственного медицинского университета.
Под нашим наблюдением находилось 96 детей в возрасте от 3 до 15 лет, из них с
различными синдромами ОГН – 72 ребенка, с ГФХГН – 14 детей; в качестве группы
контроля – 10 здоровых детей аналогичного возраста.
Основной метод нашего исследования – анализ клинико-лабораторных и
инструментальных данных. У всех детей проводилось тщательное клиническое
обследование с оценкой физического развития, подробным изучением акушерского
анамнеза, анамнеза заболевания и жизни; лабораторные (клинические анализы крови
и мочи, биохимические показатели крови и мочи, иммунологические показатели
крови), бактериологические и инструментальные (УЗИ, ЭКГ, по показаниям –
экскреторная урография ) методы исследований.
Клинические исследования крови и мочи проводили унифицированными методиками
[28].
Фракционирование белков проводили методом горизонтального электрофореза,
содержание общего белка – унифицированным биуретовым методом [20];
гликопротеиды и серомукоид в сыворотке крови – унифицированным орциновым
методом после гидролиза серной кислотой [28]. Содержание электролитов (калия и
натрия) в плазме измеряли по В.М. Бриккер [5], кальция в сыворотке крови -
комплексонометрическим титрованием, неорганического фосфора -
молибденово-кислым способом [39]. Состояние свертывающей системы крови
оценивали по результатам исследований аутокоагуляционного теста (АКТ) [3], а
также протромбиновому индексу и уровню фибриногена [28]. Уровни холестерина
(ХС) определяли по методу S. Ilka [128], b-липопротеидов (b-ЛП) ?
турбидиметрическим методом [28].
Помимо исследования клинического анализа мочи использовались методы
количественного определения форменных элементов в 1 мл моче (метод
Нечипоренко), исследование цитологии мочевого осадка, суточной экскреции белка
с мочой. Функциональное состояние почек оценивали на основании исследования
мочи по Зимницкому и по геморенальной пробе – определяли уровни мочевины
унифицированным методом, креатинина в сыворотке крови, величину реабсорбции и
скорость клубочковой фильтрации по клиренсу эндогенного креатинина,
приведенного к стандартной площади поверхности тела [22]. Уровень мочевой
кислоты крови определяли унифицированным фосфорно-вольфрамовым методом [28].
Иммунологические методы включали: определение уровней основных классов
иммуноглобулинов (А, М, G) методом радиальной иммунодиффузии в агаре по G.
Mancini et al [158]; циркулирующих иммунных комплексов - по методу,
предложенному V.Haskova et al. [122].
Определение субпопуляций лимфоцитов проводили с помощью моноклональных антител,
меченных Fits, методом иммунофлюоресценции с использованием наборов
производства фирмы “Сорбент” (г. Москва), оценивая уровни Т-лимфоцитов (CD3+
клетки), Т-хелперов (CD4+ клетки), Т-супрессоров (CD8+ клетки), натуральных
киллеров (CD16+ клетки), В-лимфоцитов (CD19+ клетки).
Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли по количеству фагоцитирующих
клеток [28]. Состояние кислородозависимых механизмов микробицидных систем
полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови оценивали с помощью теста
спонтанного поглощения и восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) до
нерастворимого диформазона [28] и уровню миелопероксидазы (МП);
кислородонезависимые механизмы оценивались на основании определения уровня
лизосомальных катионных белков (ЛКБ), с расчетом среднего цитохимического
коэффициента (сцк) содержания МП и ЛКБ в нейтрофилах [28].
Уровни ИЛ-1b, ИЛ-4 и ФНО-a в плазме венозной крови определяли иммуноферментным
способом с использованием наборов для твердофазного иммуноферментного
исследования фирмы “Протеиновый контур”, (Санкт-Петербург, Россия). Забор крови
для определения цитокинов осуществляли в 9-00 и 22-00.
Группу контроля составили 10 здоровых детей в возрасте от 6 до 15 лет.
Критериями отбора детей в группу контроля являлись: 1) отсутствие любых
заболеваний в течение последних 2 месяцев; 2) отсутствие проведения детям
вакцинации в течение 6 месяцев; 3) соответствие физического развития возрастным
нормам; 4) отсутствие признаков заболеваний и фоновых патологических состояний
(на основании тщательного клинического осмотра); 5) соответствие артериального
давления возрастным нормам.
Результаты, полученные при обследовании детей группы контроля, были взяты нами
в качестве нормативных показателей уровней ИЛ-1b, ИЛ-4 и ФНО-a в сыворотке
крови (табл. 2.1).
Таблица 2.1
Результаты обследования здоровых детей контрольной группы
ПОКАЗАТЕЛЬ
(в плазме крови)
РЕЗУЛЬТАТ
(М±SD)
ИЛ-1b
ФНО-a
ИЛ-4
10
10
10
71±18,5 нг/л
31,9±12,2 нг/л
86±12,4 нг/л
В качестве нормальных показателей значений гемограммы были приняты данные
А.Ф.Тура, Н.П.Шабалова [53]; протеинограммы – В.Н.Саратова [43]; холестерина -
Ю.В.Хмелевского с соавт [57], b–липопротеидов – М.Н.Снежковой [49];
аутокоагуляционного теста - З.С.Баркагана [4]; электролитов (калия и натрия) -
В.Н.Саратова [43], кальция и фосфора в сыворотке крови - М.А.Жуковского с соавт
- Київ+380960830922